MSc. Aida Corral Salvadó,1 Lic. Gladys Jiménez Rivero2 y MSc. José de la Paz Naranjo3
En el presente trabajo se realizó el tamizaje fitoquímico de la especie Tecoma stans L., tanto para la planta seca como fresca. Posteriormente se estandarizó la droga cruda; y a partir de ella se elaboró un extracto fluido por percolación con etanol al 70 % el cual también fue estandarizado. Se realizó la identificación de los flavonoides presentes en la droga y el extracto por cromatografía en capa delgada, y se encontró en ambos casos, según el patrón empleado, la presencia de apigenina.
DeCS: PLANTAS MEDICINALES/química; ALCALOIDES; MEDICINA TRADICIONAL; CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA.Presently work was carried out the phytochemical screening to the species Tecoma stans L. so much to the fresh plant as dry. Later on the raw drug was standardized; and starting from it got ready a fluid extract for percolation with ethanol 70 % which was also standardized. It carried out the identification of the present flavonoides in the drug and the extract from thing layer chromatography, being obtained in both cases the presence of Apigenine according to the pattern employee.
Subject headings: PLANTS, MEDICINAL/chemical; ALKALOIDS; MEDICINE, TRADITIONAL; CHROMATOGRAPHY, THIN LAYER. ]]>
Del Tecoma stans L. conocido vulgarmente como saúco amarillo, corneta amarilla, flor amarilla, flor de San Pedro, de la familia Bignonaceae y al que se lo atribuyen en Cuba propiedades diuréticas, vermífugas, estomacales, antisifilíticas e hipoglicemiantes, sólo se encontraron 2 artículos publicados que abordan el estudio fitoquímico y sugieren que los alcaloides pudieran ser los metabolitos secundarios responsables de la acción hipoglicemiante.1,2
En Cuba, México, Estados Unidos, India y Guatemala la especie Tecoma stans L. es utilizada según la medicina tradicional para el tratamiento de la diabetes mellitus, y además se corresponde con los resultados obtenidos por varios especialistas al evaluar diferentes preparaciones galénicas en modelos experimentales que así lo acreditan, por estos motivos se determinó estudiar la droga cruda y el extracto fluido obtenido a partir de la especie que crece en Cuba.
Se analizó la planta Tecoma stans L. colectaba en los alrededores del Instituto Superior de Medicina Militar "Dr. Luis Díaz Soto" en el municipio de Habana del Este, Ciudad de La Habana, en los meses transcurridos desde julio de 1999 hasta febrero del 2000, así como en los meses de marzo a junio del 2001.
La parte de la planta que se utilizó fueron las hojas, que se colectaron de forma manual. Posteriormente se beneficiaron mediante lavado y se sometieron a secado en estufa con recirculación de aire a una temperatura entre 37 y 40 °C durante 48 h. El material secado fue molinado de forma mecánica y se obtuvo un producto de partículas gruesas.
En la etapa de recolección de las hojas, la planta se encontraba en estadio de floración. La especie fue previamente clasificada con el número 691 del Herbario de Plantas Económicas del Instituto de Investigaciones Fundamentales de la Agricultura Tropical "Alejandro de Humbolt ".
El estudio fitoquímico se realizó a las hojas de las plantas fresca y seca. El método empleado fue el descrito por el Departamento de Farmacognosia de la Universidad Médica de Budapest, Hungría.
De la muestra de laboratorio previamente pulverizada y tamizada, se pesaron 5 g y se transfirieron a un frasco cónico con tapa de 250 mL; se añadieron 100 mL de alcohol al 70 %. Se agitó durante 6 h y se dejó en reposo hasta el día siguiente; se agitó 30 min, se dejó reposar alrededor de 30 min y se filtró por papel de filtro semirápido, el filtrado se colectó en matraz aforado de 100 mL y se enrasó considerándose esta como la solución muestra. Se tomó una alícuota de 15 µL que se punteó en placa fina de silicagel GF 254, utilizando como sistema de solvente tolueno: acetado de etilo: ácido fórmico en proporciones 5:4:1 y como relevador tricloruro de aluminio en etanol al 5 % y luz ultravioleta.
En la placa se punteó además como patrón de referencia apigenina en concentraciones de 2, 4, 6, y 8 µg/mL.
A la solución muestra se le realizaron los ensayos de Dragendorff para la determinación de alcaloides pues existe literatura que refiere que estos son los responsables de la acción hipoglicemiante,1,2 y el ensayo de Shinoda para flavonoides pues es de los metabolitos más abundante en la especie y existen referencias que plantean que estos pudieran ser los responsables de la acción farmacológica que se le atribuye.3,4
El extracto fluido fue preparado con el material vegetal seco y molinado. Se empleó el método de percolación en un solo paso, como se describe en la Norma Ramal de Salud Pública N° 311.
El menstruo seleccionado fue alcohol etílico al 70 % y el proceso de percolación se uniformó a 24 h en todos los casos.
Para realizar el estudio de estas formas farmacéuticas se hicieron las determinaciones que establece la Norma Ramal de Salud Pública N° 312.
Además, se propone la identificación de metabolitos secundarios (alcaloides y flavonoides) que se suponen sean los responsables de la acción farmacológica que se investigó y que la literatura científica así lo refiere; también un método de identificación, basado en cromatografía en placa delgada como se muestra a continuación.
De la muestra de ensayo se tomó una alícuota de 10 µL y se punteó directamente en la placa de silicagel GF 254, utilizando como sistema de solvente tolueno: acetato de etilo: ácido fórmico en proporciones 5:4:1. En la corrida de los extractos se punteó además como patrón de referencia apigenina en concentraciones de 2, 4, 6 y 8 µg/mL.
]]> Además se utilizó otro sistema de solvente comúnmente conocido para flavonoides como es el BAW que es el n butanol: ácido acético: agua en proporciones 4:1:5, y como revelador para ambos casos el tricloruro de aluminio en etanol al 5 % y luz ultravioleta.En el caso del sistema de solventes BAW, no sólo se reveló con tricloruro de aluminio sino que también se hizo con vapores de amoníaco, para tratar de identificar posibles tipos de flavonoides presentes en el extracto, atendiendo al cambio de coloración que presentan las manchas ante los diferentes reveladores, según bibliografía consultada.5
Los resultados del tamizaje fitoquímico mostraron la presencia de triterpenos y esteroides, azúcares reductores, fenoles y taninos, alcaloides y flavonoides, tanto para la planta fresca como seca.
Estudio farmacognóstico
Los resultados en los diferentes lotes de la droga del estudio farmacognóstico se muestran en la tabla 1.
Tabla 1. Control de calidad de los diferentes lotes de droga cruda
| Cosechas | Requisitos Macromorfológicos | Requisitos micromorfológicos | ]]> Cenizas totales (%) | Cenizas solubles en agua (%) | Cenizas insolubles en ácido (%) | Contenido de humedad (%) | Sustancias solubles (%) | Identificación de alcaloides | Identificación ]]>
de flavonoides | Identificación cromatográfica |
| Jul 1999 | Responde | Responde | 4,38 | 1,53 | 0,52 | 14,09 | 28,73 | Responde | ]]> Responde | Responde |
| Ago 1999 | Responde | Responde | 5,60 | 2,70 | 0,83 | 13,76 | 22,75 | Responde | Responde | Responde |
| Sep 1999 | ]]> Responde | Responde | 7,66 | 1,42 | 0,58 | 15,46 | 24,87 | Responde | Responde | Responde |
| Oct 1999 | Responde | ]]> Responde | 4,50 | 2,66 | 0,07 | 14,51 | 21,83 | Responde | Responde | Responde |
| Nov 1999 | Responde | Responde | ]]> 5,27 | 2,79 | 0,85 | 13,83 | 14,50 | Responde | Responde | Responde |
| Dic 1999 | Responde | Responde | 3,54 | ]]> 2,58 | 0,83 | 12,67 | 18,92 | Responde | Responde | Responde |
| Ene 2000 | Responde | Responde | 2,88 | 1,77 | ]]> 0,38 | 13,38 | 16,75 | Responde | Responde | Responde |
| Feb 2000 | Responde | Responde | 4,50 | 2,66 | 0,05 | ]]> 14,26 | 20,72 | Responde | Responde | Responde |
| Mar 2001 | Responde | Responde | 4,60 | 2,05 | 0,38 | 7,20 | ]]> 32,00 | Responde | Responde | Responde |
| Abr 2001 | Responde | Responde | 5,25 | 2,62 | 0,84 | 12,00 | 19,19 | ]]> Responde | Responde | Responde |
| May 2001 | Responde | Responde | 4,49 | 1,07 | 0,36 | 9,70 | 30,03 | Responde | ]]> Responde | Responde |
| Jun 2001 | Responde | Responde | 5,06 | 1,26 | 0,55 | 9,93 | 24,03 | Responde | Responde | Responde |
De acuerdo con el estudio macromorfológico las hojas se caracterizaron de la forma siguiente: son hojas compuestas, imparipinnadas, pecioladas de 5-13 foliolos, principalmente de 7-9, foliolos lanceolados, agudos o acuminados en el ápice y estrechados o cuneados en la base, con bordes aserrados y nervios algo pilosos.
En lo referente a las características micromorfológica, se observó en el corte transversal de la hoja, cutícula gruesa: una capa de células en la epidermis del haz, una capa de parénquima en empalizada, parénquima lagunar laxo y una capa de células epidérmicas en el envés, estomas hundidos y tricomas dendríticos unicelulares.
En el caso de la epidermis adaxial no se observaron estomas ni pelos, mientras en la cara abaxial se presentaron estomas rodeados de 6 células y abundantes bases de pelos de forma característica.
En cuanto al polvo se observaron las bases de los pelos características en forma de roseta, epidermis con una capa de células y parenquima en empalizada, así como pelos pluricelulares.
Los ensayos cualitativos de cambio de coloración son positivos por la presencia de un precipitado naranja para alcaloides y la coloración rojo intenso en la fase amílica para flavonoides.
Los resultados obtenidos en todos los lotes estudiados se muestran en la tabla 2.
| Lotes | Requisitos Organolépticos | pH | Índice de refracción | Densidad relativa | Análisis capilar | Sólidos totales (%) | Contenido alcohólico (%) | Identificación de alcaloides | ]]> Identificación de Flavonoides | Identificación cromatográfica |
| Jul 1999 | Responde | 5,2 | 1,387 | 1,008 | Responde | 15,69 | 55,12 | ]]> Responde | Responde | Responde |
| Ago 1999 | Responde | 5,5 | 1,386 | 0,984 | Responde | 7,28 | ]]>
57,23 | Responde | Responde | Responde |
| Sep 1999 | Responde | 5,5 | 1,376 | 0,974 | ]]> Responde | 8,80 | 56,90 | Responde | Responde | Responde |
| Oct 1999 | Responde | 5,3 | 1,382 | 0,994 | ]]> Responde | 11,90 | 57,09 | Responde | Responde | Responde |
| Nov 1999 | Responde | 5,7 | 1,371 | 0,956 | ]]> Responde | 5,98 | 56,56 | Responde | Responde | Responde |
| Dic 1999 | Responde | 5,2 | 1,382 | 0,987 | ]]> Responde | 12,48 | 56,56 | Responde | Responde | Responde |
| Ene 2000 | Responde | 5,0 | 1,380 | 0,979 | ]]> Responde | 12,16 | 55,84 | Responde | Responde | Responde |
| Feb 2000 | Responde | 5,2 | 1,380 | 0,986 | ]]> Responde | 11,83 | 52,29 | Responde | Responde | Responde |
| Mar 2001 | Responde | 4,9 | 1,379 | 0,991 | ]]> Responde | 14,70 | 55,12 | Responde | Responde | Responde |
| Abr 2001 | Responde | 5,1 | 1,382 | 0,997 | ]]> Responde | 16,50 | 57,09 | Responde | Responde | Responde |
| May 2001 | Responde | 5,0 | 1,372 | 0,978 | ]]> Responde | 11,10 | 55,84 | Responde | Responde | Responde |
| Jun 2001 | Responde | 4,9 | 1,373 | 0,980 | ]]> Responde | 13,23 | 56,56 | Responde | Responde | Responde |
Las características organolépticas del extracto fluido fueron las siguientes: líquido de color ámbar oscuro, transparente en capa fina y de olor característico.
El capilarograma obtenido en el análisis capilar del extracto presentó una imagen alta, de color pardo-amarillento. La franja, profundamente dentada, y en la banda se distinguió un color verdoso. Al ser expuesta a los vapores de amoníaco se intensificó el color amarillo en toda la imagen y posteriormente, a la luz ultravioleta se observó una ligera fluorescencia amarilla en la franja.
]]> La identificación de alcaloides se consideró positiva por la respuesta evidente de un precipitado naranja, mientras el ensayo de flavonoides se definió al aparecer un color rojo oscuro intenso en la fase amílica, además de la indentificación obtenida por cromatografía de capa delgada.Los resultados anteriores permitieron afirmar que los metabolitos encontrados para esta especie coincidieron con los referidos anteriormente por la literatura,1-9 además no se encontraron diferencias evidentes entre los metabolitos presentes en la planta fresca y la seca, lo que dio idea de que los beneficios a la planta aplicados no afectaron su composición química.
Atendiendo a los resultados obtenidos en el estudio farmacognóstico, aplicado bajo condiciones experimentales similares y a el número de lotes trabajados, se propusieron los siguientes índices para esta especie:
Contenido de humedad: máx 15 %
Cenizas totales: máx 6 %
Cenizas solubles en agua: máx 3 %
Cenizas insolubles en ácido clorhídrico: máx 0,9 % ]]>
Además de cumplir con los requisitos micromorfológicos y macromorfológicos señalados anteriormente y la identificación por reacción colorimétrica, se logró la identificación de la droga cruda de esta especie, al obtener un cromatograma de 5 manchas bien definidas donde coincidió plenamente la tercera con la apigenina aunque en cuanto a intensidad puede ser definida como menor o igual que la mancha del patrón de apigenina correspondiente a 2 µg/mL.
Según los resultados obtenidos en el estudio, bajo similares condiciones experimentales en un número de 12 lotes, se propusieron los siguientes índices de calidad para este extracto:
PH: de 4,8 a 5,8
Índice de refracción: de 1,375 a 1,385
Densidad relativa: de 0,950 a 1,009
Sólidos totales: mín 6 %
Contenido alcohólico: mín 55 %
En el caso del sistema BAW se obtuvieron 8 manchas resultando las mayoritarias las manchas 4,6 y 7 con Rf 0,35;0,68 y 0,82 respectivamente.
En el caso del sistema de solventes BAW y NH3 como revelador, los cambios de coloración obtenidos en las manchas 1 y 4 de invisible a azul infieren la presencia de isoflavonas carentes de la posición 5 OH libre, en el caso de la mancha 3 con cambios de pardo a naranja pudiera ser chalconas con posición 2 OH libre y/o la posición 4 OH libre y la mancha 5 que mantiene la coloración naranja pudieran ser los flavonoles con la posición 3 OH libre y con o sin la posición 5 OH libre.
Se puede concluir que se obtuvieron los valores para conformar las normas ramales de salud pública para la droga cruda y el extracto fluido de Tecoma stans L. Los métodos de identificación propuestos son válidos tanto para la droga cruda como para el extracto fluido. Por cromatografía en capa delgada se conoció de la presencia de apigenina tanto para la droga como para el extracto.
Recibido: 19 de marzo de 2002. Aprobado: 7 de junio de 2002.
MSc. Aida Corral Salvadó. Instituto Superior de Medicina Militar "Dr. Luis Díaz Soto". Laboratorio de Medicina Herbaria. Avenida Monumental y Carretera del Asilo. Ciudad de La Habana. CP 11700, Cuba. E-mail:ismmds@infomed.sld.cu
1 Master en Tecnología y control de Medicamentos. Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Investigadora Agregada.
2 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas.
3 Master en Bioquímica Clínica. Licenciado en Bioquímica.