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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Reporte preliminar del efecto ixodicida de extractos de algunas plantas sobre garrapatas Boophilus microplus]]></article-title>
<article-title xml:lang="en"><![CDATA[Preliminary report of the ixodicidal effect of some plant extracts on ticks Boophilus microplus]]></article-title>
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<institution><![CDATA[,Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia  ]]></institution>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Introduction: the current concern over the resistance of cattle to antiparasitic drugs and over their residues in the ecosystem have led to the search of tick biological control alternatives in which the use of plants with bioinsecticidal effects are included. Objective: to evaluate in vitro the acaricidal effect of ethanolic extracts of leaves from Ambrosia cumanensis Kunth, Brugmasia arborea (L.) Larget, Bidens pilosa L., Sambucus nigra L. and Nicotiana tabacum L., obtained through soxhlet, on adult ticks Boophilus microplus (acari: ixodidae). Methods: plant extracts were obtained by means of the hot extraction method (Soxhlet). Adult ticks were used for testing, which were exposed to each of the extracts in the adult immersion test. Mortality rate was estimated at 15 min and 24 h post-exposure, taking 60 % mortality as the minimum effective rate. At first, the pure extract was used; then if effective, it proceeded to make dilutions until the minimal effective concentration was found. Results: the Nicotiana tabacum extract proved to be an efficient acaricide up to a 2,5:10 dilution, with a 85 % mortality rate in both measurements; Ambrosia cumanensis showed efficacy up to 6,25:10 dilution at 24 h with a 80 % mortality rate; Brugmasia arborea was effective up to 5,0:10 dilution, with 60 and 70 % mortality rates respectively in each measurement; Bidens pilosa and Sambucus nigra did not show efficient acaricidal effect in this study. Conclusions: the Nicotiana tabacum extract proved to be the most efficient acaricide even at very high dilutions such as 2.5:10.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[ <div align="right">       <p><font face="Verdana" size="2"><B>ART&Iacute;CULO ORIGINAL</B> </font></p>       <p>&nbsp; </p> </div>     <P>      <P><b><font face="Verdana" size="4">Reporte preliminar del efecto ixodicida de    extractos de algunas plantas sobre garrapatas <I>Boophilus microplus</I> </font></b>     <P>&nbsp;     <P><font face="Verdana" size="3"><b>Preliminary report of the ixodicidal effect    of some plant extracts on ticks <i>Boophilus microplus</i> </b></font>     <P>&nbsp;     <P>&nbsp;      <P>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana" size="2"><b>Dra. Lyda Castelblanco Sep&uacute;lveda, Dr.    Oscar Javier Sanabria Rodr&iacute;guez, Dra. Anastasia Cruz Carrillo, Dr. Carlos    Eduardo Rodr&iacute;guez Molano</b> </font>      <P>      <P><font face="Verdana" size="2">Universidad Pedag&oacute;gica y Tecnol&oacute;gica    de Colombia. Tunja, Colombia. </font>     <P>&nbsp;     <P>&nbsp;  <hr size="1" noshade> <font face="Verdana" size="2"><B>RESUMEN</B></font>      <P><font face="Verdana" size="2"><B>Introducci&oacute;n:</b> la actual preocupaci&oacute;n    por la resistencia del ganado a los medicamentos antiparasitarios y su residualidad    en el ecosistema han llevado a la b&uacute;squeda de alternativas de control    biol&oacute;gico de garrapatas, dentro de las cuales se encuentra el uso de    plantas con efecto bioinsecticida. <B>    <br>   Objetivo:</B> evaluar <I>in vitro</I> el efecto ixodicida de los extractos etan&oacute;licos    de las hojas de <I>Ambrosia cumanenses</I> Kunth, <I>Brugmasia arborea </I>(L.)    Larget, <I>Bidens pilosa </I>L., <I>Sambucus nigra</I> L. y <I>Nicotiana tabacum</I>    L.<I>, </I>obtenidos por <I>Soxhlet</I> sobre garrapatas adultas <I>Boophilus    microplus</I> (acari: ixodidae). <B>    <br>   M&eacute;todos:</B> los extractos de las plantas se obtuvieron por el m&eacute;todo    de extracci&oacute;n en caliente (<I>Soxhlet</I>). Para los ensayos se utilizaron    garrapatas adultas, que fueron expuestas a cada uno de los extractos por medio    de la prueba de inmersi&oacute;n de adultas. La estimaci&oacute;n de la mortalidad    se hizo a los 15 min y 24 h posexposici&oacute;n, teniendo en cuenta como m&iacute;nimo    efectivo 60 % de mortalidad. Inicialmente se us&oacute; el extracto puro y si    presentaba eficacia se proced&iacute;a a realizar diluciones hasta encontrar    la concentraci&oacute;n m&iacute;nima eficaz. <B>    <br>   Resultados:</B> el extracto de <I>Nicotiana tabacum </I>result&oacute; ser un    ixodicida eficiente hasta la diluci&oacute;n 2,5:10, con una mortalidad de 85    % en ambas mediciones;<I> Ambrosia cumanenses </I>mostr&oacute; eficacia hasta    la diluci&oacute;n 6,25:10 a las 24 h con una mortalidad de 80 %; <I>Brugmasia    arborea </I>fue eficaz hasta la diluci&oacute;n 5,0:10 con 60 y 70 %, respectivamente,    en cada medici&oacute;n; <I>Bidens pilosa </I>y <I>Sambucus nigra</I> no evidenciaron    efecto ixodicida eficiente en este estudio. <B>    <br>   Conclusiones:</B> el extracto de <I>Nicotiana tabacum</I> demostr&oacute; ser    el ixodicida m&aacute;s eficiente, inclusive a diluciones muy altas, como la    de 2,5:10. </font>  <B></B>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P>      <P><font face="Verdana" size="2"><B>Palabras clave:</B> garrapata, extracci&oacute;n    soxhlet, ixodicida, plantas. </font> <hr size="1" noshade> <font face="Verdana" size="2"><B>ABSTRACT </B></font>     <p><font face="Verdana" size="2"><b>Introduction:</b> the current concern over    the resistance of cattle to antiparasitic drugs and over their residues in the    ecosystem have led to the search of tick biological control alternatives in    which the use of plants with bioinsecticidal effects are included. <b>    <br>   Objective:</b> to evaluate in<i> vitro</i> the acaricidal effect of ethanolic    extracts of leaves from <i>Ambrosia cumanensis</i> Kunth, <i>Brugmasia arborea    </i>(L.) Larget, <i>Bidens pilosa </i>L., <i>Sambucus nigra</i> L. and <i>Nicotiana    tabacum</i> L.<i>, </i>obtained through soxhlet, on adult ticks <i>Boophilus    microplus</i> (acari: ixodidae). <b>    <br>   Methods: </b>plant extracts were obtained by means of the hot extraction method    (Soxhlet). Adult ticks were used for testing, which were exposed to each of    the extracts in the adult immersion test. Mortality rate was estimated at 15    min and 24 h post-exposure, taking 60 % mortality as the minimum effective rate.    At first, the pure extract was used; then if effective, it proceeded to make    dilutions until the minimal effective concentration was found. <b>    <br>   Results:</b> the <i>Nicotiana tabacum</i> extract proved to be an efficient    acaricide up to a </font><font face="Verdana" size="2">2,5:10 dilution, with    a 85 % mortality rate in both measurements; <i>Ambrosia cumanensis </i>showed    efficacy up to 6,25:10 dilution at 24 h with a 80 % mortality rate; <i>Brugmasia    arborea </i>was effective up to 5,0:10 dilution, with 60 and 70 % mortality    rates respectively in each measurement; <i>Bidens pilosa</i> and <i>Sambucus    nigra </i>did not show efficient acaricidal effect in this study. <b>    <br>   Conclusions:</b> the <i>Nicotiana tabacum </i>extract proved to be the most    efficient acaricide even at very high dilutions such as 2.5:10. </font>      <p>      <p><font face="Verdana" size="2"><b>Key words: </b>tick, soxhlet extraction, acaricide,    plants.</font>  <font face="Verdana" size="2"> </font>  <hr size="1" noshade>     <p>&nbsp;</p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p>&nbsp;</p>     <p> <font face="Verdana" size="3"><b>INTRODUCCI&Oacute;N </b></font> <b> </b></p>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">La sanidad de los animales es primordial porque    de esta depende en gran parte su bienestar y, por ende, las expectativas de    la producci&oacute;n. En Colombia se presenta un fen&oacute;meno muy arraigado    y preocupante, que es la infestaci&oacute;n del ganado bovino con garrapatas,    lo cual ocasiona problemas de salud del animal y bajos rendimientos para los    productores. Se sabe que a partir de 20 a 30 garrapatas por animal, aproximadamente,    empieza a notarse disminuci&oacute;n de la ganancia de peso, de la producci&oacute;n    de leche, efecto negativo sobre la fertilidad y debilitamiento inmunol&oacute;gico;    adem&aacute;s que se favorece la transmisi&oacute;n de microorganismos como    <I>Anaplasma </I>spp. y <I>Babesia </I>spp.<SUP>1,2</SUP> En los diferentes    estudios realizados en el pa&iacute;s sobre garrapatas se determina que <I>Boophilus    microplus</I> es la especie de m&aacute;s amplia distribuci&oacute;n, la cual    afecta casi 80 % de la poblaci&oacute;n bovina, encontr&aacute;ndose desde el    nivel del mar hasta los 2 700 m sobre el nivel del mar y a temperaturas que    oscilan entre 15 y 34 &#176;C.<SUP>3</SUP> </font>     <P><font face="Verdana" size="2">De acuerdo con lo anterior, se ha calculado que    las p&eacute;rdidas asociadas con las garrapatas y moscas para la ganader&iacute;a    colombiana ascienden a 76 713 millones de pesos anuales.<SUP>3</SUP> Respecto    a esto, se han venido usando acaricidas como principal estrategia para su control;    sin embargo, estas han desarrollado resistencia a todos los ingredientes activos    existentes en el mercado, como arsenicales, organofosforados, diamidinas, piretroides    sint&eacute;ticos y lactonas macroc&iacute;clicas, que impide su control efectivo.<SUP>4</SUP>    Por otro lado, el uso indiscriminado de estos f&aacute;rmacos ha favorecido    su residualidad en el ecosistema.<SUP>5</SUP> </font>     <P><font face="Verdana" size="2">La preocupaci&oacute;n por tal situaci&oacute;n    ha hecho que se eval&uacute;en nuevas formas de control, m&aacute;s seguras    para la salud humana y el medio ambiente, entre las que se destacan el control    biol&oacute;gico por hongos entomopat&oacute;genos y bacterias.<SUP>4,6</SUP>    Adem&aacute;s, se ha enfatizado el uso de inmunizadores, la creaci&oacute;n    de razas resistentes, el cultivo de plantas repelentes, entre otras formas de    control.<SUP>3,7,8</SUP> </font>     <P><font face="Verdana" size="2">En cuanto a las plantas con efecto bioinsecticida    se destacan algunos trabajos, como en el que se evalu&oacute; el efecto del    extracto etan&oacute;lico de las hojas de <I>Azadirachta indica </I>(nim) sobre    larvas de garrapatas <I>Boophilus microplus,</I> al igual que con extractos    alcoh&oacute;lico y acuoso.<SUP>9,10</SUP> Estos extractos tambi&eacute;n fueron    probados en la fisiolog&iacute;a reproductiva de hembras ingurgitadas.<SUP>11</SUP>    Otras plantas estudiadas para el control de garrapatas son el lapacho (<I>Tabebuia    stans) </I>sobre larvas;<SUP>12</SUP> el timb&oacute;<I> (Derris uruc&uacute;)</I>    y especies de eucalipto (<I>E. citriodora, E. globulus y E. staigeriana</I>)    sobre teleoginas.<SUP>13,14</SUP> Adem&aacute;s, se reporta el efecto insecticida    de <I>Mammea americana</I> (mamey) sobre mosquitos;<SUP>9</SUP> <I>Bidens pilosa    </I>(chipaca) sobre el gorgojo de ma&iacute;z;<SUP>10</SUP> <I>Brugmasia arborea    </I>(borrachero) con efecto insecticida y repelente sobre insectos plaga,<SUP>11,12</SUP>    y <I>Nicotiana tabacum</I> (tabaco) con acci&oacute;n sobre la mosca <I>Haematobia    irritans.</I><SUP>15</SUP> </font>      <P><font face="Verdana" size="2">Apoyando esa importante labor de encontrar medios    de control biol&oacute;gico contra este ectopar&aacute;sito, se desarroll&oacute;    este proyecto con el fin de evaluar el efecto ixodicida de las hojas de altamisa    (<I>Ambrosia cumanensis),</I> borrachero (<I>Brugmasia arb&oacute;rea</I>),    chipaca (<I>Bidens pilosa</I>), sauco (<I>Sambucus nigra</I>) y tabaco (<I>Nicotiana    tabacum</I>), empleando el m&eacute;todo de extracci&oacute;n en caliente (<I>Soxhlet</I>)    contra la garrapata adulta <I>Boophilus microplus,</I> mediante una prueba de    evaluaci&oacute;n <I>in vitro</I>. </font>      <P>&nbsp;     <P>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana" size="3"><B>M&Eacute;TODOS</B> </font>      <P>      <P><font face="Verdana" size="2"><I>Tipo de estudio </I> </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">El estudio fue de tipo experimental, en el cual    se trabaj&oacute; con poblaciones de garrapatas adultas, que se expusieron <I>in    vitro</I> a los extractos (puro y diluciones) de 5 plantas, donde se evalu&oacute;    la mortalidad ocasionada a los 15 min y 24 h posexposici&oacute;n. Este proyecto    se desarroll&oacute; mediante tres etapas. La primera consisti&oacute; en la    recolecci&oacute;n del material vegetal en el municipio de Sogamoso (Boyac&aacute;)    y en la elaboraci&oacute;n de extractos en el Laboratorio de Control Biol&oacute;gico    de la Universidad Pedag&oacute;gica y Tecnol&oacute;gica de Colombia (UPTC),    sede Central Tunja. La segunda etapa correspondi&oacute; a la recolecci&oacute;n    de las garrapatas de bovinos en el municipio de Moniquir&aacute; (Boyac&aacute;),    as&iacute; como al transporte y mantenimiento bajo condiciones adecuadas de    humedad y temperatura en el mismo laboratorio. La tercera etapa consisti&oacute;    en la evaluaci&oacute;n del efecto ixodicida de los extractos y la determinaci&oacute;n    del porcentaje de mortalidad de las garrapatas con los extractos puros, diluidos    y en los grupos control. </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2"><I>Recolecta del material vegetal e identificaci&oacute;n    en herbario </I> </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">Las 5 plantas seleccionadas para la investigaci&oacute;n    fueron altamisa (<I>Ambrosia cumanensis</I>), borrachero (<I>Brugmasia arb&oacute;rea</I>),    chipaca (<I>Bidens pilosa</I>), sauco (<I>Sambucus nigra</I>) y tabaco (<I>Nicotiana    tabacum)</I>; que se seleccionaron sobre la base de estudios previos,<SUP>16</SUP>    en los cuales se reportan sus usos cient&iacute;ficos y populares como insecticidas;    adem&aacute;s se tuvo en cuenta que dentro de su composici&oacute;n qu&iacute;mica    tuvieran sustancias como alcaloides, taninos, cumarinas, saponinas, flavonoides    o nicotina. El material se colect&oacute; en Sogamoso, municipio ubicado en    el centro oriente del Departamento de Boyac&aacute; a una latitud de 5&#186;    42' 57&quot; Norte, y a una longitud de 72&#186; 55' 38&quot; Oeste, as&iacute;    como en el campus de la Universidad Pedag&oacute;gica y Tecnol&oacute;gica de    Colombia en la ciudad de Tunja, con coordenadas 5&#176;332 16.253 N 73&#176;212    9.143 O. Se encuentra en un rango altitudinal entre 2 600 y 2 800 m sobre el    nivel del mar y cuenta con una temperatura promedio de 10 a 17 &#176;C. El muestreo    se hizo una vez localizados los individuos, donde se tomaron 3 ejemplares de    cada uno, se preservaron en etanol 70 % y se llevaron a secado por 3 d&iacute;as    a 70 &#176;C. Posteriormente, se realiz&oacute; el etiquetado y montaje, y se    determin&oacute; e incluy&oacute; a la colecci&oacute;n de referencia del herbario    de la UPTC, bajo la denominaci&oacute;n de Carlos Eduardo Rodr&iacute;guez Molano    (<I>CERM 01</I>[020548 UPTC], <I>02 </I>[020549 UPTC], <I>03</I> [020550 UPTC],    <I>04</I> [020551 UPTC] y <I>05</I> [020552]). </font>      <P>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana" size="2"><I>Elaboraci&oacute;n de extractos</I> </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">Se tomaron aproximadamente 500 g de cada una    de las plantas siguientes: altamisa (<I>Ambrosia cumanensis</I>), borrachero    (<I>Brugmasia arb&oacute;rea</I>), chipaca (<I>Bidens pilosa</I>), sauco (<I>Sambucus    nigra</I>) y tabaco (<I>Nicotiana tabacum)</I>, y se transportaron en recipientes    bien aireados, como son bolsas de malla o sacos harineros limpios, con vistas    a su posterior selecci&oacute;n y conservaci&oacute;n en el Laboratorio de Control    Biol&oacute;gico de la UPTC. Para la adecuada conservaci&oacute;n se separaron    las hojas (material a tener en cuenta) del resto de la planta con la ayuda de    unas tijeras y se distribuyeron de manera uniforme envueltas en papel peri&oacute;dico,    luego se realiz&oacute; el proceso de secado a la sombra durante 20 d. Adicionalmente    se tuvo que destapar, revolver y verificar cada una de las muestras, para evitar    la presencia y el desarrollo de hongos, debido al grado de humedad de las hojas.    </font>     <P><font face="Verdana" size="2">La extracci&oacute;n de principios activos se    realiz&oacute; con un solvente en caliente (etanol), m&eacute;todo <I>Soxhlet</I>,    para despu&eacute;s comparar las diferencias con el m&eacute;todo de extracci&oacute;n    con solvente fr&iacute;o (lixiviaci&oacute;n). Se emple&oacute; un equipo de    extracci&oacute;n <i>Soxhlet</i> cl&aacute;sico (<a href="#fig1">Fig.</a>).    </font>      <P>&nbsp;     <P align="center"><img src=/img/revistas/pla/v18n1/f0114212.jpg" width="580" height="445"><a name="fig1"></a>      
<P>&nbsp;     <P><font face="Verdana" size="2">En esta t&eacute;cnica, el material vegetal (hojas)    se fraccion&oacute; con la finalidad de aumentar la superficie de contacto del    solvente con el material a extraer, para facilitar la mejor y mayor disoluci&oacute;n    de principios activos y se coloc&oacute; en la c&aacute;mara de extracci&oacute;n    del equipo <I>Soxhlet</I> (aproximadamente 100 g). Luego se calent&oacute; el    etanol situado en el recipiente contenedor, evitando que llegara a ebullici&oacute;n;    el vapor del solvente ascendi&oacute; hasta el condensador, lo cual permiti&oacute;    que el solvente se depositara gota a gota sobre la muestra, con ello se obtuvo    la extracci&oacute;n de los compuestos. Cuando el nivel de solvente condensado    en la c&aacute;mara de extracci&oacute;n alcanz&oacute; la parte superior, este    reboz&oacute; y descendi&oacute; hacia el recipiente contenedor por el sistema    de sif&oacute;n (parte lateral de la c&aacute;mara de extracci&oacute;n) y retorn&oacute;    junto con los compuestos al recipiente contenedor de solvente. Este proceso    se repiti&oacute; m&uacute;ltiples veces hasta que se complet&oacute; la extracci&oacute;n    de los compuestos presentes en la planta y se concentr&oacute; en el disolvente,    lo cual constituy&oacute; el extracto final. Para esa extracci&oacute;n se emplearon    150 mL de solvente (etanol 96 %, previa purificaci&oacute;n), de los cuales    se recuper&oacute; alrededor de 50 % mediante concentraci&oacute;n en el rotaevaporador    a una temperatura de 78 &#186;C y 60 rpm, el producto final se pes&oacute; y    se obtuvieron 20 g de extracto puro. </font>      <P><font face="Verdana" size="2">Los principios activos logrados se separaron    mediante cromatograf&iacute;a en capa fina, usando s&iacute;lica gel como adsorbente;    se distribuy&oacute; una porci&oacute;n del extracto mediante un capilar y se    dej&oacute; evaporar el solvente para efectuar el corrimiento dentro de una    c&aacute;mara de vidrio, con la mezcla de solventes elegidos. Los solventes    con los que se logr&oacute; una mejor separaci&oacute;n cromatogr&aacute;fica    fueron el cloroformo y el etanol, mezclados en diferentes proporciones entre    s&iacute;. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">Para localizar los componentes que no eran apreciables    a simple vista, se us&oacute; una l&aacute;mpara de luz ultravioleta. </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P>      <P><font face="Verdana" size="2"><I>Recolecta de garrapatas y mantenimiento bajo    condiciones del laboratorio</I> </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">Las garrapatas se obtuvieron de vacas de raza    Pardo Suizo, en la finca San Jos&eacute;, vereda El Papayal del municipio de    Moniquir&aacute;, ubicado en el noroccidente del departamento de Boyac&aacute;,    con una temperatura promedio de 20 &#176;C y una altitud de 1 700 m sobre el    nivel del mar. El muestreo se llev&oacute; a cabo siguiendo lo recomendado,<SUP>    </SUP>pasando la mano de modo suave sobre las diferentes regiones del cuerpo    del hospedador, en las cuales habitualmente se localizan las garrapatas; una    vez detectadas se procedi&oacute; a desprenderlas de manera directa con los    dedos &iacute;ndice y pulgar, volte&aacute;ndolas hacia arriba y tir&aacute;ndolas    de modo suave en contrapelo hasta desprenderlas.<SUP>17,18</SUP> Luego se colocaron    en envases de vidrio, se transportaron al Laboratorio de Control Biol&oacute;gico    de la UPTC, donde se lavaron con una soluci&oacute;n de hipoclorito de sodio    al 2,5 % para prevenir contaminaci&oacute;n microbiol&oacute;gica, se eliminaron    aquellas que presentaron mutilaciones como p&eacute;rdidas de patas y palpos,    adem&aacute;s de aquellas muertas o con movimiento pobre de patas, observadas    mediante estereoscopio. </font>      <P><font face="Verdana" size="2">A continuaci&oacute;n se seleccionaron grupos    de 10 garrapatas al azar de un lote de 600, que fueron distribuidas en cajas    de <I>Petri</I> ya identificadas y cubiertas con una malla porosa; adem&aacute;s    se fijaron con bandas de caucho para evitar el escape. Las cajas de Petri se    mantuvieron en condiciones de laboratorio en una incubadora Memmert<SUP>&#174;</SUP>    previamente calibrada a 23 &#176;C y 70 % de humedad relativa. Las garrapatas    expuestas a las pruebas de inmersi&oacute;n con los diferentes extractos vegetales    y grupos control, se colocaron en la incubadora, para evitar que factores externos    alteraran los &iacute;ndices de mortalidad. </font>      <P>      <P><font face="Verdana" size="2"><I>Evaluaci&oacute;n del efecto ixodicida de    los extractos puros y diluidos </I> </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">Para la evaluaci&oacute;n del efecto ixodicida,    las garrapatas se expusieron a los extractos mediante la prueba de inmersi&oacute;n    de adultas, dise&ntilde;ada para la exposici&oacute;n de garrapatas a ixodicidas    convencionales y, actualmente, empleada para el estudio de extractos naturales    y su acci&oacute;n ixodicida. Esta prueba se realiza para medir &iacute;ndices    de oviposici&oacute;n y eclosi&oacute;n de huevos y n&uacute;mero de larvas;<SUP>19</SUP>    sin embargo, en este estudio la prueba solo se utiliz&oacute; para tomar los    datos de mortalidad. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">La prueba de inmersi&oacute;n de adultas se realiz&oacute;    utilizando 20 garrapatas por prueba, es decir, 10 por cada uno de los grupos    y su correspondiente repetici&oacute;n, escogiendo individuos adultos, aparentemente    saludables, de tama&ntilde;o homog&eacute;neo. Se colocaron en cajas de <I>Petri</I>    ya lavadas, marcadas y desinfectadas; a cada una se le a&ntilde;adi&oacute;    el extracto puro de la planta o la diluci&oacute;n (volumen total de 5 mL).    Se aplicaron los extractos de altamisa (<I>Ambrosia cumanensis</I>), borrachero    (<I>Brugmansia arborea</I>), chipaca (<I>Bidens pilosa</I>), sa&uacute;co (<I>Sambucus    nigra</I>) y tabaco (<I>Nicotiana tabacum</I>), un grupo control positivo y    uno negativo. Las garrapatas se sumergieron uniformemente a fin de permanecer    expuestas en su totalidad, durante 15 min; transcurrido este tiempo, se les    elimin&oacute; el exceso de l&iacute;quido utilizando una toalla absorbente.    Con respecto a las diluciones, es importante aclarar que estas se determinaron    teniendo en cuenta los resultados observados (mortalidad m&iacute;nima de 60    %), aumentando o disminuyendo la diluci&oacute;n seg&uacute;n el caso. Para    las diluciones el n&uacute;mero de garrapatas expuestas fue de unas 400 divididas    en grupos de 10, con sus respectivas repeticiones. </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana" size="2">En la determinaci&oacute;n de la concentraci&oacute;n    efectiva se adopt&oacute; el m&eacute;todo de m&aacute;ximas y m&iacute;nimas    utilizado en la determinaci&oacute;n de la dosis terap&eacute;utica de los f&aacute;rmacos,    en este trabajo se tom&oacute; el extracto total (100 %). Bajo este concepto,    la concentraci&oacute;n del extracto se aument&oacute; o disminuy&oacute;, alrededor    de 50 %, respecto a la anterior, de acuerdo con los resultados de mortalidad.    Cuando el porcentaje de mortalidad fue bueno, se prepar&oacute; el extracto    a una diluci&oacute;n mayor hasta encontrar la m&iacute;nima eficaz. En el caso    de encontrar una eficacia baja, se trabaj&oacute; con preparaciones menos diluidas    hasta encontrar la concentraci&oacute;n eficaz de cada extracto. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">En relaci&oacute;n con el grupo control negativo,    tratado con agua destilada, este no deb&iacute;a superar el 10 % de mortalidad,    asegurando as&iacute; la correcta manipulaci&oacute;n del material biol&oacute;gico,<SUP>17</SUP>    dado que fue mantenido bajo las mismas condiciones de laboratorio con el resto    de poblaci&oacute;n de garrapatas. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">En el grupo control positivo se emple&oacute;    como principio activo la cipermetrina utilizando la diluci&oacute;n 1:1, es    decir fue empleado 1 mL de producto en 1 L de agua, seg&uacute;n indicaci&oacute;n    de la etiqueta. Sin embargo, este no mostr&oacute; una mortalidad superior a    60 %, por consiguiente se opt&oacute; por repetir la prueba, obteni&eacute;ndose    los mismos resultados. En consecuencia, se realiz&oacute; la prueba empleando    Amitraz<SUP>&#174;</SUP> y Ethion<SUP>&#174;</SUP> como representantes del grupo    de las diamidinas y organofosforados, respectivamente, y Bendiocarb<SUP>&#174;</SUP>,    preparados seg&uacute;n las diluciones recomendadas por los fabricantes. </font>      <P><font face="Verdana" size="2">La lectura del n&uacute;mero de garrapatas muertas    se efectu&oacute; a los 15 min y 24 h, posexposici&oacute;n a los extractos    y grupos control. Cabe se&ntilde;alar que las garrapatas se consideraban muertas    cuando no respond&iacute;an a diferentes est&iacute;mulos como; fuente luminosa    (l&aacute;mpara hal&oacute;gena 6 V; 25 W),<SUP>17</SUP> para este trabajo se    emple&oacute; la l&aacute;mpara del estereoscopio; reacci&oacute;n al momento    de ser tocadas con un puntero romo en la regi&oacute;n cervical;<SUP>20</SUP>    estimulaci&oacute;n con gas carb&oacute;nico eliminado por respiraci&oacute;n.<SUP>21</SUP>    Bajo las condiciones anotadas, las garrapatas se consideraron muertas al no    presentar movimientos de las patas o desplazamientos, observadas al estereoscopio.    </font>      <P><font face="Verdana" size="2">El criterio de efectividad de las soluciones    (extractos puros y diluciones), se tom&oacute; seg&uacute;n la mortalidad manifestada    por las garrapatas adultas, teniendo en cuenta lo ya se&ntilde;alado. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">Los resultados de mortalidad se promediaron para    obtener un dato final, el cual se consider&oacute; para realizar el an&aacute;lisis    estad&iacute;stico. </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2"><I>An&aacute;lisis estad&iacute;stico</I> </font>     <P>      <P><font face="Verdana" size="2">El estudio se realiz&oacute; usando un dise&ntilde;o    completamente al azar y el m&eacute;todo de comparaci&oacute;n de 2 proporciones    (vivas y muertas), para determinar el intervalo de confianza, usando la inferencia    sobre una proporci&oacute;n; para ello se tom&oacute; el n&uacute;mero de casos    (garrapatas muertas por prueba) sobre el tama&ntilde;o de la muestra, mediante    el programa EPIDAT para el an&aacute;lisis epidemiol&oacute;gico de datos tabulados,    versi&oacute;n 3.0, que cuenta con un nivel de confianza de 95 %, con el cual    se determin&oacute; el porcentaje de mortalidad.</font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P>&nbsp;     <P>      <P><font face="Verdana" size="3"><B>RESULTADOS </B></font><font face="Verdana" size="2">    </font>      <P>      <P><font face="Verdana" size="2">Por el m&eacute;todo <I>Soxhlet</I> se obtuvieron    20 g de extracto puro de cada planta. Las caracter&iacute;sticas de color, olor    y consistencia, se mostraron similares para todos los extractos (<a href=/img/revistas/pla/v18n1/t0114113.gif">tabla    1</a>). En los tratamientos evaluados se observ&oacute; el mismo comportamiento    entre el grupo tratado y su r&eacute;plica. </font>      
<P><font face="Verdana" size="2">Se realizaron pruebas de cromatograf&iacute;a    en capa fina a los extractos puros obtenidos de las 5 plantas, que permitieron    determinar la presencia de compuestos qu&iacute;micos. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">De acuerdo con los datos obtenidos, el extracto    de <I>N. tabacum </I>(tabaco) result&oacute; ser eficaz sobre garrapatas adultas    en las pruebas realizadas hasta la diluci&oacute;n 2,5:10 a los 15 min y las    24 h. El extracto puro y la diluci&oacute;n 5,0:10 mostraron una mortalidad    de 100 % y la diluci&oacute;n 2,5:10 exhibi&oacute; una mortalidad de 85 % (<a href=/img/revistas/pla/v18n1/t0214113.gif">tabla    2</a>). </font>      
<P><font face="Verdana" size="2">El extracto etan&oacute;lico de <I>A. cumanensis    </I>(altamisa) obtenido por <I>Soxhlet</I> sobre garrapatas adultas se evalu&oacute;    en 3 diluciones 7,5:10, 6,25:10 y 5,0:10, mostrando eficacia hasta la diluci&oacute;n    6,25:10 solo hasta las 24 h posexposici&oacute;n (<a href=/img/revistas/pla/v18n1/t0214113.gif">tabla    2</a>). </font>      
<P><font face="Verdana" size="2">Con los an&aacute;lisis de <I>B. arborea</I>    (borrachero) se obtuvo una mortalidad de 65 y 75 % con el extracto puro, y con    la diluci&oacute;n 5,0:10 de 60 y 70 %, a los 15 min y 24 h, respectivamente    (<a href=/img/revistas/pla/v18n1/t0214113.gif">tabla 2</a>). </font>      
<P><font face="Verdana" size="2">En cuanto a la acci&oacute;n del extracto etan&oacute;lico    puro de hojas de <I>B. pilosa</I> (chipaca) contra las formas adultas de la    garrapata <I>B. microplus</I>, no mostr&oacute; eficacia puesto que el porcentaje    de mortalidad obtenido no super&oacute; el 45 % a los 15 min y las 24 h posexposici&oacute;n.    </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana" size="2">De igual manera, la exposici&oacute;n de las    garrapatas al extracto etan&oacute;lico puro de hojas de <I>S. nigra</I> (sauco)    no result&oacute; eficaz, porque la m&aacute;xima mortalidad fue de 50 % con    el extracto puro. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">En el grupo control negativo (agua destilada),    la supervivencia fue del 100 %, manteniendo las mismas condiciones de laboratorio    utilizadas para los diferentes tratamientos, por lo cual se evit&oacute; que    factores medio ambientales incidieran o alteraran los resultados. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">En cuanto al grupo control positivo, se utilizaron    representantes de cada uno de los grupos qu&iacute;micos, como es el caso de    Amitraz<SUP>&#174;</SUP> (diamidinas), Bendiocarb<SUP>&#174;</SUP> (carbamatos),    Cipermetrina<SUP>&#174;</SUP> (piretroides) y Ethion<SUP>&#174;</SUP> (organofosforados),    que evidenciaron una mortalidad de 15, 5, 25 y 15 %, respectivamente, sobre    <I>B. microplus</I> luego de haber sido expuestas por 24 h, lo cual demuestra    ineficacia en la aplicaci&oacute;n de las dosis recomendadas por los laboratorios.    Por lo anterior, se hizo necesario repetir las pruebas del control positivo    a fin de descartar que los resultados correspondieran a productos vencidos,    alterados por factores medio ambientales o de almacenamiento, o por fallas en    su preparaci&oacute;n. Estas se efectuaron con garrapatas procedentes de una    finca del municipio de Rond&oacute;n (Boyac&aacute;), donde se hizo evaluaci&oacute;n    previa del procedimiento de control de ectopar&aacute;sitos, encontrando que    se efectuaba con productos, dosis y frecuencias adecuadas. Esto dio como resultado    para el primer producto evaluado (cipermetrina) 15 % de mortalidad en las formas    adultas de garrapatas; por consiguiente, se tuvo que probar con Ethion<sup>&#174;</sup>,    con el cual se evidenci&oacute; 100 % de mortalidad, tras 20 min de exposici&oacute;n.    As&iacute; se corrobor&oacute; la eficacia de los productos utilizados y el    m&eacute;todo de aplicaci&oacute;n.</font>      <P>&nbsp;      <P><font face="Verdana" size="2"><B><font size="3">DISCUSI&Oacute;N</font></B>    </font>      <P>      <P><font face="Verdana" size="2">El extracto de <I>N. tabacum</I> ocasion&oacute;    mortalidad superior a los extractos de las dem&aacute;s plantas en estudio,    atacando directamente la din&aacute;mica poblacional del ectopar&aacute;sito    y disminuyendo as&iacute; la supervivencia de las garrapatas adultas postratamiento.    Los datos del presente estudio ratifican la acci&oacute;n de esta planta reportada    por varios autores que la se&ntilde;alan como fungicida, insecticida, repelente    y acaricida. Su acci&oacute;n insecticida se atribuye a su principal componente,    la nicotina, la cual act&uacute;a como una sustancia t&oacute;xica de contacto    e ingesti&oacute;n.<SUP>22,23</SUP> La nicotina es un alcaloide natural que    act&uacute;a al mimetizar la acetilcolina sobre los receptores nicot&iacute;nicos,    que genera nuevos impulsos y ocasiona contracciones espasm&oacute;dicas, convulsiones    y finalmente la muerte del par&aacute;sito por par&aacute;lisis.<SUP>5</SUP>    Hoy d&iacute;a se encuentra en el mercado un grupo de insecticidas conocido    como neonicotinoide, que son copias sint&eacute;ticas o derivadas de la estructura    de la nicotina como son Imidacloprid<SUP>&#174;</SUP>, Thiacloprid<SUP>&#174;</SUP>,    Nitempiram<SUP>&#174;</SUP>, Acetamiprid<SUP>&#174;</SUP> y Thiamethoxam<SUP>&#174;</SUP>    entre otros.<SUP>22</SUP> </font>     <P><font face="Verdana" size="2">Al analizar los resultados de este trabajo <I>in    vitro</I>, se puede confirmar la eficacia de <I>N. tabacum</I> sobre garrapatas    <I>B. microplus</I> y plantear su uso como ixodicida natural en las producciones    bovinas, previa evaluaci&oacute;n de posibles efectos secundarios. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">El extracto de<I> A. cumanensis</I> mostr&oacute;    cierta eficacia contra las garrapatas usando el extracto puro y en diluciones    bajas, luego de 24 h de exposici&oacute;n; quiz&aacute; debido a su contenido    de taninos y cumarinas. Estudios realizados recientemente, utilizando la misma    planta pero con el m&eacute;todo de extracci&oacute;n de lixiviaci&oacute;n,    reportan que el porcentaje de mortalidad en garrapata adulta <I>B. microplus</I>    con extracto puro tras 24 h de exposici&oacute;n result&oacute; de 15 %,<SUP>5</SUP>    sin duda, inferior a 95 % encontrado en el presente trabajo. As&iacute; mismo,    la diluci&oacute;n 7,5:10 present&oacute; mortalidad del 80 % y con 5:10 mortalidad    de 45 % a las 24 h de exposici&oacute;n, que difiere de otros reportes,<SUP>5</SUP>    en los cuales se manifest&oacute; un porcentaje de mortalidad de 10 y 5 %, respectivamente.    Adem&aacute;s, cabe se&ntilde;alar que el compuesto 1,8-cineol, encontrado en    todas las plantas de la familia Asteraceae, incluida la altamisa, se ha se&ntilde;alado    en varios estudios como buen insecticida contra las garrapatas.<SUP>24</SUP>    </font>     <P><font face="Verdana" size="2"><I>B. arborea </I>mostr&oacute; ligera eficacia    como ixodicida, usando extracto puro o muy poco diluido. Se se&ntilde;ala que    las plantas de la familia Solanaceae producen alcaloides conocidos como chaconina,    solanina, tomatina, atropina y escopolamina, las cuales poseen un efecto insecticida    poderoso en la mayor&iacute;a de los insectos, sin embargo, algunas especies    han aprendido a tolerar estas toxinas.<SUP>22</SUP> En estudios donde se us&oacute;    la extracci&oacute;n por lixiviaci&oacute;n,<SUP>5</SUP> se se&ntilde;ala que    ni el extracto puro ni las diluciones evaluadas para el borrachero muestran    efecto contra las garrapatas. Se sabe que la mortalidad de las teleoginas expuestas    al extracto var&iacute;a, de acuerdo con la concentraci&oacute;n del extracto    y el m&eacute;todo de extracci&oacute;n,<SUP>25 </SUP>por lo que se concluye    que para el presente trabajo el m&eacute;todo de extracci&oacute;n en caliente,    determin&oacute; el efecto ixodicida de <I>B. arborea </I>sobre las garrapatas    <I>B. microplus</I>. </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana" size="2"><I>B. pilosa</I>, aunque cuenta en su composici&oacute;n    con alcaloides, saponinas y taninos no mostr&oacute; gran efecto acaricida,    puesto que el porcentaje de mortalidad obtenido a las 24 h result&oacute; apenas    de 45 %; sin embargo, este porcentaje se present&oacute; mayor en comparaci&oacute;n    con el 10 % reportado al evaluar la mortalidad de la garrapata adulta mediana,    en condiciones de clima c&aacute;lido utilizando la lixiviaci&oacute;n como    m&eacute;todo de extracci&oacute;n.<SUP>5 </SUP>Pese a esta notable ineficacia    de <I>B. pilosa</I> como ixodicida natural, no se puede desconocer su actividad    antimicrobiana reportada contra<i> Mycobacterium tuberculosis, M.</i> <I>smegmatis    </I>y <I>Plasmodium falciparum</I>.<SUP>26-28</SUP> Adem&aacute;s, en un estudio    realizado reci&eacute;n en la UPTC, se demostr&oacute; su efecto bactericida    sobre <I>Sthaphylococcus aureus.<SUP>29</SUP></I> </font>      <P><font face="Verdana" size="2">El extracto de <I>S. nigra </I>tambi&eacute;n    demostr&oacute; poca eficacia contra las garrapatas, porque la mortalidad m&aacute;xima    alcanzada fue de 50 %. No obstante, en este estudio super&oacute; la tasa alcanzada    (15 %) con el extracto puro de la misma planta empleando la extracci&oacute;n    por lixiviaci&oacute;n.<SUP>5</SUP> </font>     <P><font face="Verdana" size="2">En conclusi&oacute;n, el presente trabajo cobra    gran importancia puesto que los extractos etan&oacute;licos de las 5 plantas    evaluadas evidenciaron cierto grado de eficacia frente al control de garrapatas    en diferentes proporciones, resaltando la mayor efectividad de <I>N. tabacum</I>.    As&iacute; mismo, al confrontar los resultados con los 2 tipos de extracci&oacute;n:    lixiviaci&oacute;n (fr&iacute;o) y <I>Soxhlet</I> (calor), este &uacute;ltimo    provoc&oacute; un mayor porcentaje de mortalidad en la garrapata adulta <I>B.    microplus;</I> debido a que el procedimiento de extracci&oacute;n puede influenciar    la cantidad de los componentes activos en el extracto final. </font>     <P><font face="Verdana" size="2">Por &uacute;ltimo, deduciendo que los principios    activos de las plantas son factibles a cambios, se recomienda la realizaci&oacute;n    de nuevos estudios utilizando diferentes partes de estas, m&eacute;todos de    extracci&oacute;n y solventes. Adem&aacute;s, la realizaci&oacute;n de pruebas    <I>in vivo</I>, analizando la relaci&oacute;n riesgo-beneficio en los animales    de inter&eacute;s.</font>     <P>&nbsp;      <P>      <P><font face="Verdana" size="3"><B>REFERENCIAS BIBLIOGR&Aacute;FICAS</B> </font>      <P>      <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">1. L&oacute;pez E, L&oacute;pez G, Orduz S. Control    de la garrapata <I>Boophilus microplus</I> con <I>Metarhizium anisopliae</I>:    estudios de laboratorio y campo. Rev Colomb Entomol. 2009;35(1):42-6.     </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">2. Junquera P. Garrapatas <I>Boophilus </I>en    el ganado bovino: biolog&iacute;a, prevenci&oacute;n y control. Par&aacute;sitos    del ganado [en l&iacute;nea] 2011 Marzo 26 [citada 05 abr 2011];1-11. Disponible    en: <U><FONT  COLOR="#0000ff"><a href="http://parasitosdelganado.net/index.php?option=comcontent&view=article&id=26&Itemid=471" target="_blank">http://parasitosdelganado.net/index.php?option=comcontent&amp;view=article&amp;id=26&amp;Itemid=471</a></FONT>    </U> </font>      <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">3. Benavides Ortiz EV, Hern&aacute;ndez G, Romero    Nasayo A, Castro H, Rodr&iacute;guez JL. Evaluaci&oacute;n preliminar de extractos    del Neem (<I>Azadirachta indica</I>) como alternativa para el control de la    garrapata del ganado <I>Boophilus microplus </I>(Acari: ixodida). Rev Colomb    Entomol. 2001;27(1-2):1-8.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">4. Raymomd K, Rojas F, Benavides E, Cotes AM,    Villamizar L, Ronderos V, et al. Efecto de hongos entomopat&oacute;genos sobre    la garrapata del ganado <I>Boophilus microplus</I> (Acari: Ixodida): uso de    activadores de patogenicidad. Rev Colomb Entomol. 2004;30(1):1-6.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">5. Rodr&iacute;guez A, Rodr&iacute;guez CE, Cruz    A. Efecto ixodicida de los extractos etan&oacute;licos de algunas plantas sobre    garrapatas <I>Rhipicephalus</I> (<I>Boophilus</I>) <I>microplus</I>. Rev MVZ    C&oacute;rdoba. 2010;15(3):2175-84.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">6. Brum J, Faccini H, Amaral M. Infec&ccedil;&aacute;o    em teleoginas de <I>Boophilus microplus</I> (Acari: Ixodida): Histopatolog&iacute;a    e testes <I>in vitro</I>. Arquito Brasileiro de Medicina Veterinaria e Zootecnia.    1991;43(1):3-7.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">7. Vargas M, Montero C, P&eacute;rez D, S&aacute;nchez    D, Machado H, Joglar M, et al. Comparaci&oacute;n de dos esquemas de inmunizaci&oacute;n    en bovinos con el inmun&oacute;geno Gavac Plus (tres dosis iniciales contra    dos dosis). La Habana: Congreso Biotecnolog&iacute;a Nov 27- Dic 02; 2005.    </font>      <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">8. Rivera M. Hemoparasitosis bovinas. Caracas:    Ed. Anauco; 1996.     </font>      <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">9. Chungsamarnyart N, Jiwajinda S, Jansawan W.    Acaricidal effect of plant crude-extracts on tropical cattle ticks (<I>Boophilus    microplus)</I>. Nat Sci Suppl. 1991;25:90-100.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">10. Furlong J, Costa Junior L, Chagas A, Reis    E. CL50 e CL90 dos extractos alc&oacute;olico e aquoso de nim indiano (<I>Azadirachta    indica</I>) em larvas de <I>Boophilus microplus</I>. En: Anais do XII congresso    Brasileiro de Parasitologia Veterin&aacute;ria. Rio de Janeiro: Universidade    Federal Rural do Rio de Janeiro; 2002.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">11. Lawrence W. Adverse effects of extracts of    <I>Artocarpus altilis </I>Park and Aza<I>dirachta indica</I> (A. Juss) on the    reproductive physiology of the adult female tick, <I>Boophilus microplus</I>    (Canest). Invertebrate Reproduction and Development [en l&iacute;nea] 1993 [citada    05 Abr 2011];23(2-3):159-64. Disponible en: <U><FONT  COLOR="#0000ff"><a href="http://www.informaworld.com/smpp/content%7Edb=all%7Econtent=a934106664" target="_blank">http://www.informaworld.com/smpp/content~db=all~content=a934106664</a></FONT>    </U> </font>      <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">12. Mendes MC, Braggio MM, Haraguchi M. Efeitos    dos extratos de <I>Sesbania virgata, Tabebuia ochraceae e Tecomastans</I> em    larvas de <I>Boophilus microplus</I> (Canestrini). En: Anais do XII congresso    Brasileiro de Parasitologia Veterin&aacute;ria. Rio de Janeiro: Universidade    Federal Rural do Rio de Janeiro; 2002.     </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">13. Costa Junior LM, Chagas CS, Furlong J, Reis    ES, Mascaro CP. Efici&eacute;ncia <I>in vitro</I> de roten&oacute;ides extra&iacute;dos    do Timb&oacute; (<I>Derrisuruc&uacute;) </I>em tele&oacute;ginas do carrapato    <I>Boophilus microplus. </I>En: Anais do XII congresso Brasileiro de Parasitologia    Veterin&aacute;ria. Rio de Janeiro: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro;    2002.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">14. Chagas AC. Efeito acaricida de productos    naturais e sint&eacute;ticos de plantas e solventes sobre<I> Boophilus microplus</I>    (Canestrini, 1887) (Acari: Ixodidae) [Tesis Doctoral]. Belo Horizonte: Escuela    de Veterinaria, Universidad e Federal de Minas Gerais; 2001.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">15. Ramirez M, Cruz A, Rodr&iacute;guez C. Evaluaci&oacute;n    preliminar del efecto de los extractos etan&oacute;licos de cinco plantas medicinales    sobre la mosca de los cuernos <I>Hematobia irritans</I> L. (Diptera: Muscidae).    Revista Actualidad Divulgaci&oacute;n Cient&iacute;fica U.D.C.A. 2009;12(1):69-78.        </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">16. Cruz A, Rodriguez C. Caracterizacion de la    riqueza botanica del Pantano de Vragas, Paipa (Boyac&aacute;) [Trabajo de Grado].    Tunja, Colombia: Universidad Pedag&oacute;gica y Tecnol&oacute;gica de Colombia,    Facultad de Ciencias Agropecuarias; 2007.     </font>     <!-- ref --><P><font face="Verdana" size="2">17. Gallardo JS, Morales J. <I>Boophilus microplus</I>    (Acari: Ixodidae): Preoviposici&oacute;n, ovoposici&oacute;n, incubaci&oacute;n    de los huevos y geotropismo. Bioagro. 1999;11(3):77-87.     </font>     ]]></body>
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