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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Procesos tecnológicos para la obtención de ß-caroteno y glicerol a partir de Dunaliella sp. en la Salina "Las Cumaraguas"]]></article-title>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Technological processes were developed for ß-carotene and glycerol extraction from Dunaliella sp. at "Las Cumaraguas" Saltworks. Dunaliella sp. microalgae was characterize. It was established the technological flow of the process from laboratory data; energy balances and necessary energetic calculations were done, in order to select and size the required equipment for a pilot plant scale to produce one ton of ß-carotene. Two possibilities were evaluated: extraction with organic solvents and extraction with supercritical fluids. The procedure showed that ß-carotene and glycerol extractions are possible by means of the presented technological diagram, with 15,4 % of biomass ß-carotene yield and 5 % of biomass glycerol yield, for a conventional extraction and a yield of 70 % for ß-carotene from pigments and 5 % of biomass glycerol yield, for extraction with supercritical fluid.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[ <p align="right"><font face="Verdana" size="2"><b>ARTICULOS</b></font></p>     <p align="center">&nbsp;</p>     <p align="left"><font face="Verdana" size="2"><b><font size="4"><strong>Procesos tecnol&oacute;gicos para la obtenci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol a partir de <em>Dunaliella sp. </em> en la Salina &quot;Las Cumaraguas&quot;</strong></font></b></font></p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"><b><font size="3"> Technological processes for obtaining ß-carotene and glycerol from Dunaliella sp. at &quot;Las Cumaraguas&quot; Saltworks</font></b></font></p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify"> <font face="Verdana" size="2"><b>     MSc. Noel Jos&eacute; Acacio-Chirino<sup>I</sup>, Dra.C. Lourdes Margarita Zumalac&aacute;rregui-de C&aacute;rdenas<sup>I</sup><sup>I</sup></b></font></p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"> <sup>I</sup>Universidad Nacional Experimental Francisco de Miranda U.N.E.F.M., Venezuela,        <a href="mailto:noel_acacio@hotmail.com">noel_acacio@hotmail.com</a>    ]]></body>
<body><![CDATA[<br>   <sup>II</sup>Universidad Tecnol&oacute;gica de La Habana Jos&eacute; Antonio Echeverr&iacute;a, CUJAE, Cuba, <a href="mailto:lourdes@quimica.cujae.edu.cu">lourdes@quimica.cujae.edu.cu</a></font></p>     <p align="justify">&nbsp;</p> <hr>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"><b>RESUMEN</b></font></p>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"> </font><font face="Verdana" size="2"> </font><font face="Verdana" size="2"> Se desarrollaron los procesos tecnol&oacute;gicos para la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol a partir de Dunaliella sp. en la Salina &quot;Las Cumaraguas&quot;. Se caracteriz&oacute; fisicoqu&iacute;micamente esta microalga. Se estableci&oacute; el flujo tecnol&oacute;gico del proceso partiendo de datos de laboratorio. Se realiz&oacute; el balance de materiales y los c&aacute;lculos energ&eacute;ticos necesarios. para poder dimensionar los equipos donde se lleva a cabo la separaci&oacute;n a escala piloto que permita la producci&oacute;n de una tonelada de ß-caroteno. Se evaluaron dos alternativas: extracci&oacute;n con solventes org&aacute;nicos y extracci&oacute;n con fluido supercr&iacute;tico. El procedimiento permiti&oacute; establecer que es posible la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol mediante los esquemas tecnol&oacute;gicos presentados con un rendimiento de ß-caroteno de biomasa: 15,4 % y rendimiento de glicerol de la biomasa: 5 % para la extracci&oacute;n convencional y un rendimiento de ß-caroteno de los pigmentos: 70 % y rendimiento de glicerol de la biomasa: 5 % para fluido supercr&iacute;tico.</font></p>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"><b>Palabras clave:</b> extracci&oacute;n, ß-caroteno, glicerol, Dunaliella sp.</font></p> <hr>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"> <b>ABSTRACT</b></font></p>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"> </font><font face="Verdana" size="2"> </font><font face="Verdana" size="2"> Technological processes were developed for ß-carotene and glycerol extraction from <em>Dunaliella sp. </em> at &quot;Las Cumaraguas&quot; Saltworks. <em>Dunaliella sp</em>. microalgae was characterize. It was established the technological flow of the process from laboratory data; energy balances and necessary energetic calculations were done, in order to select and size the required equipment for a pilot plant scale to produce one ton of ß-carotene. Two possibilities were evaluated: extraction with organic solvents and extraction with supercritical fluids. The procedure showed that ß-carotene and glycerol extractions are possible by means of the presented technological diagram, with 15,4 % of biomass ß-carotene yield and 5 % of biomass glycerol yield, for a conventional extraction and a yield of 70 % for ß-carotene from pigments and 5 % of biomass glycerol yield, for extraction with supercritical fluid.</font></p>     <p align="justify"><font face="Verdana" size="2"> <b>Keywords:</b> extraction, ß-carotene, glycerol, <em>Dunaliella sp</em>.</font></p> <hr>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b><font face="Verdana" size="3">INTRODUCCI&Oacute;N</font></b></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Se han ensayado diversas estrategias de cultivo de <em>Dunaliella salina </em>para maximizar la producci&oacute;n de ß-caroteno, no se han logrado &eacute;xitos debido a que las altas tasas de crecimiento no se corresponden con una mayor acumulaci&oacute;n intracelular de ß-caroteno. Sin embargo, se ha observado que una mayor producci&oacute;n de biomasa incrementa el contenido de ß-caroteno por volumen de cultivo [1].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Actualmente se considera que existen diferentes alternativas, ya sea partiendo de fuentes de origen natural v&iacute;a fermentaci&oacute;n, o productos naturales unidos a procesos de extracci&oacute;n con el empleo de solventes y condiciones de reacci&oacute;n menos complejas, que de cierta forma pudieran ser factibles. Est&aacute; demostrado que los carotenoides y dem&aacute;s componentes derivados, espec&iacute;ficamente el ß-caroteno, pueden obtenerse a partir de diferentes fuentes naturales, vegetales, algas, hongos, entre otros, buscando precisamente m&eacute;todos de extracci&oacute;n seguros y eficientes de los que se obtengan carotenoides con la necesaria pureza [2].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Por otra parte, se han incorporado en los estudios de extracci&oacute;n nuevos m&eacute;todos como: la extracci&oacute;n asistida con ultrasonido, la extracci&oacute;n asistida con microondas, la extracci&oacute;n con solvente acelerado y la extracci&oacute;n con fluidos supercr&iacute;ticos. Estos procesos acortan el tiempo de extracci&oacute;n, disminuyen el consumo de solvente, aumentan el rendimiento de la extracci&oacute;n y en general, mejoran la calidad del extracto [3].</font></p>     <div align="justify"><font size="2" face="Verdana">El objetivo de la presente investigaci&oacute;n es desarrollar procesos tecnol&oacute;gicos para la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol a partir de <em>Dunaliella sp. </em> en la Salina &quot;Las Cumaraguas&quot;, a partir de datos para la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol a partir de microalgas obtenidos en ensayos de laboratorio.</font></div>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify"><strong><font size="3" face="Verdana">FUNDAMENTACION TE&Oacute;RICA</font></strong></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Las microalgas se consideran hoy en d&iacute;a como un gran recurso natural y se estudian cada vez m&aacute;s para su explotaci&oacute;n industrial con diversos fines [4, 5]. Una de las caracter&iacute;sticas que hace tan atractivas a las microalgas es la rapidez con la que se desarrollan, requiriendo esencialmente de la aportaci&oacute;n de nutrientes y de la luz solar.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Una de las aplicaciones m&aacute;s interesantes de las microalgas es la relacionada con las sustancias de inter&eacute;s qu&iacute;mico-farmac&eacute;utico, debida a la utilidad pr&aacute;ctica que estas encuentran en biomedicina, farmacolog&iacute;a, fitocosm&eacute;tica y en la industria alimentaria.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">A partir de diferentes especies de microalgas se extraen sustancias como vitaminas, pigmentos, alcoholes, amino&aacute;cidos, polisac&aacute;ridos sulfatados, glicerol, &aacute;cidos grasos polinsaturados, enzimas, extractos acuosos reguladores del crecimiento, ceras, biosurfactantes, fosfol&iacute;pidos, lecitinas, beta&iacute;nas y precursores de prostaglandinas, dependiendo de las que sean capaces de sintetizar, as&iacute; como sustancias con efectos terap&eacute;uticos como: cicatrizantes, inmunorreguladores, anticancer&iacute;genos, tensorreguladores, antinflamatorios, hipocolesterol&eacute;micos, entre otros.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Diversos carotenoides presentan propiedades beneficiosas para la salud humana, lo que les sit&uacute;a como potenciales ingredientes alimentarios funcionales. Por ejemplo, se han descrito propiedades preventivas de la lute&iacute;na sobre el c&aacute;ncer [6] as&iacute; como sobre los da&ntilde;os retinales relacionados con el envejecimiento [7, 8].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Diversos estudios epidemiol&oacute;gicos muestran evidencias de que la actividad antioxidante asociada al ß-caroteno puede prevenir el c&aacute;ncer en diversos &oacute;rganos como pulmones, est&oacute;mago, c&eacute;rvix, p&aacute;ncreas, colon, recto, pr&oacute;stata y ovarios [9, 10].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">En condiciones de crecimiento de alto estr&eacute;s, <em>Dunaliella sp. </em> es capaz de almacenar gran cantidad de carotenoides, principalmente ß-caroteno, llegando a suponer hasta un 14 % de su peso seco [11]. Esta microalga es una de las fuentes naturales m&aacute;s importantes de este compuesto, incluyendo grandes cantidades del is&oacute;mero 9-cis [12] de mayor actividad antioxidante.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Una de las caracter&iacute;sticas de <em>Dunaliella sp</em>., que resulta ventajosa al extraer compuestos de su citoplasma, es la ausencia de una pared celular r&iacute;gida de polisac&aacute;ridos como otras muchas microalgas. La c&eacute;lula posee una membrana plasm&aacute;tica flexible cubierta por un recubrimiento mucoso [11]. Esto permite que la c&eacute;lula se adapte a r&aacute;pidos cambios en la salinidad del medio, pudiendo variar su volumen en gran medida sin sufrir da&ntilde;os. La ausencia de pared celular facilita el intercambio de masa durante los procesos de extracci&oacute;n [12].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong>Nuevos procesos de extracci&oacute;n </strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Los m&eacute;todos tradicionales de extracci&oacute;n s&oacute;lido - l&iacute;quido requieren altos tiempos de residencia y grandes cantidades de solvente. Estos m&eacute;todos se basan en la selecci&oacute;n del solvente apropiado para una separaci&oacute;n, utilizando calor y agitaci&oacute;n. El uso de los solventes es un aspecto a investigar, entre otras razones por la toxicidad. La extracci&oacute;n con disolventes siempre deja un residuo en el aceite, particularmente cuando la extracci&oacute;n se realiza con hexano, que es el disolvente m&aacute;s com&uacute;nmente usado, pero la legislaci&oacute;n internacional restringe la cantidad de hexano que deben contener los productos extra&iacute;dos y cada vez ser&aacute; m&aacute;s restrictiva, previ&eacute;ndose que en un futuro se limite su uso y se sustituya por otros disolventes [3].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Actualmente se han desarrollado otros m&eacute;todos de extracci&oacute;n como: la extracci&oacute;n asistida con ultrasonido, la extracci&oacute;n asistida con microondas, la extracci&oacute;n con solvente acelerado y la extracci&oacute;n con fluidos supercr&iacute;ticos. Estos procesos acortan el tiempo de extracci&oacute;n, disminuyen el consumo de solvente, aumentan el rendimiento de la extracci&oacute;n y, en general, mejoran la calidad del extracto.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Un fluido supercr&iacute;tico (FSC) es cualquier substancia a una temperatura y presi&oacute;n por encima de su punto cr&iacute;tico termodin&aacute;mico. Tiene la propiedad de difundirse a trav&eacute;s de los s&oacute;lidos como un gas y de disolver los materiales como un l&iacute;quido. Adicionalmente, puede cambiar r&aacute;pidamente la densidad con peque&ntilde;os cambios en la temperatura o presi&oacute;n. Estas propiedades lo hacen conveniente como un sustituto de los solventes org&aacute;nicos en los procesos de extracci&oacute;n.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Algunas ventajas de los FSC son: poseen alto coeficiente de difusi&oacute;n y viscosidad m&aacute;s baja que los l&iacute;quidos; despreciable tensi&oacute;n superficial, lo cual facilita la operaci&oacute;n de extracci&oacute;n dada la r&aacute;pida penetraci&oacute;n al interior de los poros de la matriz heterog&eacute;nea; la selectividad durante la extracci&oacute;n puede ser manipulada con la variaci&oacute;n de las condiciones de operaci&oacute;n temperatura y presi&oacute;n afectando la solubilidad de varios componentes en el fluido supercr&iacute;tico; no deja residuos qu&iacute;micos; la extracci&oacute;n con CO<sub>2</sub> supercr&iacute;tico permite su f&aacute;cil recuperaci&oacute;n por procesos de reciclaje.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">El CO<sub>2</sub> es el fluido supercr&iacute;tico m&aacute;s utilizado debido a que es no t&oacute;xico, no inflamable, no corrosivo, incoloro, no es costoso, se elimina f&aacute;cilmente, no deja residuos, sus condiciones cr&iacute;ticas son relativamente f&aacute;ciles de alcanzar y se consigue con diferentes grados de pureza; se puede trabajar a baja temperatura y por tanto, se pueden separar compuestos termol&aacute;biles; se puede obtener a partir de procesos de fermentaci&oacute;n alcoh&oacute;lica y ayuda a prevenir la degradaci&oacute;n t&eacute;rmica de ciertos componentes qu&iacute;micos del alimento cuando son extra&iacute;dos[13-15]. Sus aplicaciones han estado dirigidas a la obtenci&oacute;n de aceites vegetales a partir de oleaginosas, desacidificaci&oacute;n de aceites con alto contenido de &aacute;cidos grasos, eliminaci&oacute;n de colesterol, aprovechamiento de residuos de la refinaci&oacute;n y obtenci&oacute;n de compuestos minoritarios de alto valor agregado como son el escualeno, los tocoferoles y los fitosteroles [14].</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Se han realizado estudios para extraer antioxidantes con la tecnolog&iacute;a de FSC como los reportados para la c&aacute;scara de pistacho (<em>Pistachia vera</em>) a 35–60 &ordm;C y 10,1-35,5 MPa [16]; el romero (<em>Rosmarinus officinalis L.) </em> 40–60 &ordm;C y 10–40 MPa [17]; semillas de cilantro (<em>Coriander sativum</em>) 58–85 &ordm;C y 11,6–2,8 MPa [18] y la yerba buena (<em>Hierochloe odorata</em>) 40 &ordm;C y 25–35 MPa [19].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Otro estudio muestra la obtenci&oacute;n de oleorresina de p&aacute;prika por FSC utilizando di&oacute;xido de carbono en condiciones supercr&iacute;ticas, y compara los resultados con la obtenci&oacute;n por extracci&oacute;n con hexano, solvente org&aacute;nico m&aacute;s empleado en la industria alimentaria y para el que no se permiten cantidades residuales de m&aacute;s de 25 mg/kg de producto. Se se&ntilde;ala que por el car&aacute;cter lipof&iacute;lico de los carotenoides presentes en la p&aacute;prika, estos se solubilizan f&aacute;cilmente en el CO<sub>2</sub> supercr&iacute;tico, permitiendo su extracci&oacute;n a bajas temperaturas y evitando la p&eacute;rdida de compuestos termol&aacute;biles causada por degradaci&oacute;n t&eacute;rmica. Otra de las ventajas es que el CO<sub>2</sub>, despu&eacute;s de la etapa de despresurizaci&oacute;n y aislamiento de la oleorresina, puede ser recogido y reciclado. La extracci&oacute;n se realiz&oacute; a 70 &ordm;C y 35 MPa [20].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Mendiola [21] llev&oacute; a cabo estudios para la obtenci&oacute;n de extractos de <em>Spirulina platensis </em> empleando fluidos sub y supercr&iacute;ticos. Los mejores resultados, en t&eacute;rminos de rendimiento de los extractos, los obtuvo con CO<sub>2</sub> y etanol a 7,8 MPa y 55 &ordm;C, alcanzando 8 % de rendimiento. Cuando se emple&oacute; &uacute;nicamente CO<sub>2</sub> puro, los rendimientos alcanzados fueron inferiores.</font></p>     <div align="justify"><font size="2" face="Verdana">Finalmente se tiene que entre los factores de estr&eacute;s ambiental para inducir la producci&oacute;n de ß-caroteno se tienen: salinidad alta, temperatura elevada, calidad e intensidad de luz y baja concentraci&oacute;n de nutrientes. Entre los compuestos de gran inter&eacute;s comercial a partir de <em>Dunaliella sp. </em> los carotenoides sobresalen precisamente y de estos es el ß-caroteno, el que en mayor cantidad se presenta en las cepas de <em>Dunaliella sp. </em> [22].</font></div>     <p align="justify">&nbsp; </p>     <p align="justify"><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><strong>MATERIALES Y M&Eacute;TODOS</strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Caracterizaci&oacute;n fisicoqu&iacute;mica de la microalga Dunaliella sp.</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Los m&eacute;todos para la realizaci&oacute;n de las determinaciones est&aacute;n dispuestos por la American Public Health Asociation (APHA) [23] y se resumen en la <a href="#t1">tabla 1</a>.</font></p>     <p align="center"><font size="2" face="Verdana"><a name="t1"></a><strong>TABLA  1. T&Eacute;CNICAS DE AN&Aacute;LISIS QU&Iacute;MICO EMPLEADAS EN EL LABORATORIO</strong></font></p>     <div align="center">   <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">     <tr>       <td width="129" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Determinaci&oacute;n </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">S&iacute;mbolo </font></p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo utilizado </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="129" valign="top">    <p align="center"><font size="2" face="Verdana">pH </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">pH </font></p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo electrom&eacute;trico (N&deg; 4 500 -H+B, APHA, AWWA, WPCF) </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="129" valign="top">    <p align="center"><font size="2" face="Verdana">Ox&iacute;geno disuelto </font></p>               <p align="center"><font size="2" face="Verdana">mg/L </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">OD </font></p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo Winkler Modificado (N&deg; 4 500 -0 APHA, WPCF, AWWA) </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="129" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="center"><font size="2" face="Verdana">F&oacute;sforo total </font></p>               <p align="center"><font size="2" face="Verdana">ppm </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">PT </font></p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo del cloruro esta&ntilde;oso (N&deg; 4 500 -P B y 4 500 -P E, APHA, WPCF, AWWA) </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="129" valign="top">    <p align="center"><font size="2" face="Verdana">Salinidad </font></p>               <p align="center"><font size="2" face="Verdana">µS/cm </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    <p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo electrom&eacute;trico (N&deg; 2 520 A , APHA, AWWA, WPCF) </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="129" valign="top">    <p align="center"><font size="2" face="Verdana">Turbidez </font></p>               <p align="center"><font size="2" face="Verdana">UNT </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo nefelom&eacute;trico (N&deg; 2 130 B, APHA, WEF, AWWA) </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="129" valign="top">    <p align="center"><font size="2" face="Verdana">Humedad </font></p></td>       <td width="70" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">H </font></p></td>       <td width="400" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">M&eacute;todo gravim&eacute;trico (N&deg; 2 540 B, APHA, WEF, AWWA) </font></p></td>     </tr>   </table> </div>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Procedimiento para la obtenci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol a partir de la microalga Dunaliella sp. a escala de laboratorio</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Araujo et al., propusieron el procedimiento para la obtenci&oacute;n de ß-caroteno a escala de laboratorio [24]. Es v&aacute;lido aclarar que como es un procedimiento establecido, no se aplica dise&ntilde;o de experimentos. Adem&aacute;s, se determina la concentraci&oacute;n de carotenos totales y las fracciones de ß-caroteno [25].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">A partir de los &iacute;ndices de extracci&oacute;n obtenidos a escala de laboratorio se realiz&oacute; el balance de materiales y los c&aacute;lculos energ&eacute;ticos necesarios, para poder dimensionar los equipos para llevar a cabo la separaci&oacute;n a escala piloto que permita la producci&oacute;n de una tonelada de ß-caroteno.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><em><strong>Metodolog&iacute;a para estimar la cantidad de glicerol a escala de laboratorio</strong></em></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">De acuerdo a lo reportado por Hern&aacute;ndez [26] la biomasa resultante del cultivo de <em>Dunaliella salina </em> se debe acondicionar en condiciones de agitaci&oacute;n, se filtra al vac&iacute;o, se extrae el ß-caroteno para finalmente extraer el glicerol con isopropanol. Este procedimiento es relativamente sencillo, no necesita reactivos ni equipos especiales y garantiz&oacute; un rendimiento del 4 al 5 %.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify">&nbsp;</p>     <p><font size="3"><strong><font face="Verdana">RESULTADOS Y DISCUSI&Oacute;N</font></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Condiciones fisicoqu&iacute;micas de desarrollo de la microalga Dunaliella sp.</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Una vez realizado el muestreo de cinco puntos (estaciones experimentales) en la salina Las Cumaraguas, se realizaron los an&aacute;lisis de laboratorio de los siguientes par&aacute;metros: pH, turbidez, salinidad, ox&iacute;geno disuelto y f&oacute;sforo total (ver <a href="#t2">tabla 2</a>).</font></p>     <p align="center"><font size="2" face="Verdana"><a name="t2"></a><strong>TABLA  2. PAR&Aacute;METROS FISICOQU&Iacute;MICOS OBTENIDOS DE <em>DUNALIELLA SP </em>., EN LA SALINA &quot;LAS  CUMARAGUAS&quot;</strong></font></p>      <div align="center">   <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000" bgcolor="#FFFFFF">     <tr>       <td width="157" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Par&aacute;metro </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">pH </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Turbidez    <br>       </font><font size="2" face="Verdana">(UNT) </font></p>          </td>       <td width="84" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Salinidad </font><font size="2" face="Verdana">(µS/cm) </font></p>       </td>       <td width="120" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Ox&iacute;geno disuelto     <br>       (OD) (mg/L) </font></p></td>       <td width="80" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">F&oacute;sforo </font></p>             <p><font size="2" face="Verdana">total </font></p>         <font size="2" face="Verdana">(ppm) </font></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Estaci&oacute;n 1 </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">8,68 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">36 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">253 746 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,06 </font></p></td>       <td width="80" rowspan="10" valign="top"><font size="2" face="Verdana"> Cantidad menor al valor m&iacute;nimo indicado por el m&eacute;todo </font></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Estaci&oacute;n 2 </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">8,67 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">44 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">234 950 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,06 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Estaci&oacute;n 3 </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">8,65 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">40 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">253 746 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,06 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Estaci&oacute;n 4 </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">8,62 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">40 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">234 950 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,06 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Estaci&oacute;n 5 </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">8,62 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">40 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">244 348 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,06 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Valor promedio </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">8,65 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">40 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">242 348 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Desv. Est&aacute;ndar </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,03 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">2,83 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">10 407,8 </font></p></td>       <td width="120">    <p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Coef. Variaci&oacute;n (%) </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,32 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">7,07 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">4,29 </font></p></td>       <td width="120">    <p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Sesgo estandarizado </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">-0,008 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,000 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,553 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>     </tr>     <tr>       <td width="157" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Curtosis estandarizada </font></p></td>       <td width="72" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">-1,234 </font></p></td>       <td width="73" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">0,913 </font></p></td>       <td width="84" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">-1,519 </font></p></td>       <td width="120" valign="top">    <p><font face="Verdana"><font size="2"></font></font> </p></td>     </tr>   </table> </div>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Al realizar el an&aacute;lisis estad&iacute;stico se evidencia que las muestras cumplen con una distribuci&oacute;n normal de acuerdo a los valores de sesgo y curtosis estandarizadas y que los coeficientes de variaci&oacute;n alrededor del valor medio son peque&ntilde;os.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">El pH obtenido es cercano a los reportados en la bibliograf&iacute;a consultada. Se han reportado valores de pH superiores a 8,3 [27]. Se plantea que el pH &oacute;ptimo para el crecimiento de <em>Dunaliella sp., </em>se encuentra entre 7 y 9 en medios de cultivo [28]. Por lo anterior, se trabajar&aacute; al pH medio obtenido.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">El valor de OD encontrado en este estudio permite clasificar el tipo de ambiente analizado en un medio hip&oacute;xico (OD 1-5 mg.L<sup>-1</sup>) propicio para la generaci&oacute;n de un estr&eacute;s ambiental, el cual caracteriza la formaci&oacute;n de una forma evolutiva de cisto por parte de la microalga <em>Dunaliella sp. </em>A este bajo nivel de ox&iacute;geno se hace casi exclusivo el crecimiento de esta microalga ya que, en este ambiente, las especies pisc&iacute;colas, e incluso gran parte de muchas microalgas del plancton marino no sobreviven, lo que hace a <em>Dunaliella sp. </em>un microorganismo &quot;extremo&quot; por su capacidad para desarrollarse en ambientes con poco ox&iacute;geno [29].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Una vez establecidos los par&aacute;metros fisicoqu&iacute;micos donde se desarrolla la microalga, se tiene que el tiempo de crecimiento en la fase exponencial son 21 d&iacute;as, con lo cual se logra una densidad celular de 10<sup>30</sup> cel/L.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Se debe determinar el contenido de humedad de la biomasa producida seg&uacute;n el m&eacute;todo gravim&eacute;trico a fin de conocer la cantidad de biomasa h&uacute;meda que entra realmente al proceso de obtenci&oacute;n (ver <a href="#t3">tabla 3</a>).</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="center"><font size="2" face="Verdana"><a name="t3"></a><strong>TABLA  3. CONTENIDO DE HUMEDAD EN LA BIOMASA</strong></font></p>      <div align="center">   <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">     <tr>       <td width="123" rowspan="4" valign="top">    <p>&nbsp; </p>               <p><font size="2" face="Verdana">Biomasa </font></p></td>       <td valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">% Humedad </font></p></td>       <td width="123" rowspan="4" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Valor promedio </font></p>               <p><font size="2" face="Verdana">    <br>           81 % </font></p></td>       <td width="123" rowspan="4" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Desviaci&oacute;n est&aacute;ndar </font></p>               <p><font size="2" face="Verdana">2,49 % </font></p></td>       <td width="123" rowspan="4" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Coeficiente de Variaci&oacute;n </font></p>               <p><font size="2" face="Verdana">3 % </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="123" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">% H 1 =83,72 % </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="123" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">% H 2 =80,44 % </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="123" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">% H 3 =78,84 % </font></p></td>     </tr>   </table> </div>       <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Descripci&oacute;n del proceso tecnol&oacute;gico para la obtenci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol </em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La demanda mundial de ß-caroteno est&aacute; alrededor de las 500 toneladas [30]. Por otra parte, en la dieta diaria se recomienda la ingesti&oacute;n de aproximadamente 100 mg de ß-caroteno sin efectos secundarios t&oacute;xicos. De los 28 946 101 habitantes que tiene Venezuela, el 9 % son adultos mayores, 40,9 % son menores de 15 a&ntilde;os y el 50,7 % restante est&aacute; entre 16 y 60 a&ntilde;os, de donde, para cubrir la ingesta diaria de ß-caroteno para cada uno de los grupos que lo requieren para potenciar el sistema inmunol&oacute;gico y dem&aacute;s beneficios, se requerir&iacute;an las cantidades que se reportan en la <a href="#t4">tabla 4</a>.</font></p>     <p align="center"><font size="2" face="Verdana"><a name="t4"></a><strong>TABLA  4. REQUERIMIENTOS DE ß-caroteno POR GRUPOS DE EDADES</strong></font></p>      <div align="center">   <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">     <tr>       <td width="199" valign="top">    <p>&nbsp; </p></td>       <td width="139" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">N&uacute;mero </font></p></td>       <td width="152" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">T/a&ntilde;o de ß-caroteno </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="199" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Adultos mayores </font></p></td>       <td width="139" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">2 605 149 </font></p></td>       <td width="152" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">95,1 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="199" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Menores de 15 a&ntilde;os </font></p></td>       <td width="139" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">11 838 855 </font></p></td>       <td width="152" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">432,1 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="199" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Entre 16 y 60 a&ntilde;os </font></p></td>       <td width="139" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">14 501 997 </font></p></td>       <td width="152" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">529,3 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="199" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">Total </font></p></td>       <td width="139" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">28 946 101 </font></p></td>       <td width="152" valign="top">    <p><font size="2" face="Verdana">1 056,5 </font></p></td>     </tr>   </table> </div>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">De este c&aacute;lculo queda demostrada la demanda del producto en Venezuela, aunque se limitara su uso a los adultos mayores. Como quiera que el estudio solamente se ha realizado a escala de laboratorio, se seleccion&oacute; una base de c&aacute;lculo de producci&oacute;n de una tonelada de ß-caroteno al a&ntilde;o para dimensionar una planta que pudiera considerarse piloto y que, de la experiencia en ella, se pudiera extraer la informaci&oacute;n para realizar el escalado, de resultar ventajosa la propuesta.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Se establecieron 270 d&iacute;as de producci&oacute;n al a&ntilde;o, y dado que se conoce que el crecimiento m&aacute;ximo del cultivo se logra a los 21 d&iacute;as, ser&iacute;a posible realizar 13 ciclos de producci&oacute;n en el a&ntilde;o.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Por otra parte, se conoce que se obtienen 8 toneladas/ha/a&ntilde;o de biomasa seca [30] y si se realizan 13 ciclos, se producir&aacute;n 0,62 toneladas/ha/ciclo de biomasa seca.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Si se desea obtener 1 tonelada de ß-caroteno/a&ntilde;o, y se produce en 13 ciclos, se requerir&aacute;n 77,78 kg de ß-caroteno /ciclo.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Teniendo en cuenta el volumen de los tanques de crecimiento, seleccionados como de 100 m<sup>2</sup> con 1 cm de profundidad, y el &aacute;rea que se necesita por ciclo, se tienen 81 estanques de 100 m<sup>2</sup> de &aacute;rea destinados al crecimiento de la biomasa, que se ubicar&iacute;an en el &aacute;rea de la Salina &quot;Las Cumaraguas&quot;. Esta localizaci&oacute;n puede ser efectuada ya que se dispone de 0,96 km<sup>2</sup> de salina.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">A partir de los resultados de la revisi&oacute;n bibliogr&aacute;fica y del esquema del flujo del proceso a escala de laboratorio se procedi&oacute; a proponer un esquema tecnol&oacute;gico para procesar 2 695 kg de biomasa algal por ciclo, manteniendo los rendimientos obtenidos a escala de laboratorio. Con esta informaci&oacute;n se realizaron los balances de materiales en hojas de c&aacute;lculo de <em>Microsoft Excel </em> y se obtuvieron los flujos m&aacute;sicos de cada una de las corrientes. La secuencia de etapas del proceso se describe a continuaci&oacute;n.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong>Cultivo de la microalga <em>Dunaliella sp</em>.</strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">El cultivo de la microalga es la primera etapa del proceso de obtenci&oacute;n de compuestos a partir de estas. El cultivo se puede realizar en fotobiorreactores, estanques abiertos o en sistemas cerrados dise&ntilde;ados y ubicados de forma tal que la luz solar incida de forma directa sobre la superficie del agua para que sea absorbida completamente y as&iacute; lograr la mayor concentraci&oacute;n de biomasa. Se seleccion&oacute; el estanque abierto por la facilidad de su operaci&oacute;n, la absorci&oacute;n de luz solar necesaria para el crecimiento sin tener que suministrar luz artificialmente, la facilidad del mantenimiento y el ser mucho m&aacute;s econ&oacute;mico que los fotobiorreactores. Sin embargo, se debe prestar atenci&oacute;n a las posibles contaminaciones del medio de cultivo, aunque en las condiciones que se desarrolla <em>Dunaliella sp. </em> es dif&iacute;cil el crecimiento de microorganismos que puedan alterar las condiciones de crecimiento. Se dise&ntilde;an como estanques rectangulares al aire libre, con una paleta que permite la circulaci&oacute;n de las algas [31].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Los cultivos iniciales se siembran en estanques de fibra sint&eacute;tica de 3 m<sup>2</sup> de forma alargada dotados de un sistema de agitaci&oacute;n mec&aacute;nica por paletas. Las condiciones de operaci&oacute;n son: profundidad de cultivo de 10 cm, densidad inicial del cultivo 10<sup>18</sup> cel.L<sup>-1</sup>.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Cada tres semanas se efect&uacute;a la siembra de los 21 estanques de 3 m<sup>2</sup> a partir de los cultivos de in&oacute;culo con una densidad inicial de inoculaci&oacute;n de 10<sup>18</sup> c&eacute;l.L<sup>-1</sup>. Esto se realiza con la finalidad de generar la biomasa necesaria para inocular los sistemas de cultivo masivo y la adaptaci&oacute;n progresiva de las algas a las condiciones finales de producci&oacute;n. Los tanques permanecen en r&eacute;gimen estanco, asegurando los requerimientos nutritivos y de salinidad que permitan una producci&oacute;n m&aacute;xima. Es importante resaltar que la concentraci&oacute;n de sal se establece de 10 % a 35 % en p/v para que ocurra aumento de la biomasa.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Para llevar a cabo los cultivos en tanques de 100 m<sup>2</sup> se utiliza como in&oacute;culo el cultivo procedente de la cosecha final al cabo de los 21 d&iacute;as producido en los tanques de 3 m<sup>2</sup>, con una densidad celular de 10<sup>30</sup> c&eacute;l.L<sup>-1</sup>. Estos cultivos de gran volumen se desarrollan en r&eacute;gimen estanco.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La producci&oacute;n de pigmentos es de 34,0 % y el rendimiento de ß-caroteno es 45,18 % bajo las condiciones controladas [24].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">En la <a href="/img/revistas/ind/v29n3/f0102317.gif" target="_blank">figura 1</a> se muestra un esquema t&iacute;pico de un estanque para el cultivo de microalgas. Se conoce que la microalga <em>Dunaliella sp. </em> no requiere de la adici&oacute;n de CO<sub>2</sub> se&ntilde;alada en la figura ya que se logran mayores crecimientos sin la adici&oacute;n de CO<sub>2</sub> [32].</font></p>     
<p align="justify"><font size="2" face="Verdana">En la <a href="/img/revistas/ind/v29n3/f0202317.jpg" target="_blank">figura 2</a> se presenta una vista de estanques para el cultivo de microalgas.</font></p>     
<p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong>Medio de cultivo y factores que influyen en el crecimiento</strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Para el cultivo de microalgas es necesario tener grandes cantidades de agua, para el crecimiento y la producci&oacute;n de pigmentos. Las fuentes de agua son aguas salinas provenientes del mar. El medio de cultivo utilizado es medio Miguel compuesto por una soluci&oacute;n A (KNO<sub>3</sub> al 20,2 % p/v, H<sub>2</sub>O), una soluci&oacute;n B (4 gramos de NaHPO<sub>4</sub>12H<sub>2</sub>O, 4 gramos de CaCl<sub>2</sub>6H<sub>2</sub>O, HCl (98 %) y FeCl<sub>3</sub>3 mol/L. Se toman 2 mL de la soluci&oacute;n A y se mezclan con 1 mL de la soluci&oacute;n B, se agregan a 1 litro de agua de mar y se calienta a 70 &deg;C por 20 minutos.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong>Obtenci&oacute;n de ß-caroteno</strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Filtraci&oacute;n</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La biomasa h&uacute;meda se debe adecuar a las condiciones que permitan realizar la extracci&oacute;n de los pigmentos en la etapa posterior, por lo que se debe realizar una filtraci&oacute;n a fin de reducir el contenido de agua. Para ello es necesario un filtro tipo Nutsche, un tipo simple de filtro &quot;batch&quot; que consiste en un tanque con una base perforada, que soporta el medio filtrante; de este modo queda retenida la biomasa en el medio filtrante.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Centrifugaci&oacute;n</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La biomasa se necesita separarla del medio de cultivo mediante la centrifugaci&oacute;n. En esta etapa se rompen las membranas plasm&aacute;ticas de las microalgas y se liberan las clorofilas, carotenos y glicerol presentes. El equipo utilizado es un hidrocicl&oacute;n para realizar la separaci&oacute;n por filtraci&oacute;n tangencial. Este es un equipo centr&iacute;fugo con una pared est&aacute;tica, donde la fuerza centr&iacute;fuga se genera por el movimiento del l&iacute;quido. Para separaciones de biomasa, es el conveniente ya que se usa para tama&ntilde;os de part&iacute;culas desde 4 hasta 500 µm, por lo que la separaci&oacute;n se da de forma eficiente y sin necesidad de a&ntilde;adir compuestos qu&iacute;micos. Para procesar la alimentaci&oacute;n de biomasa algal, se debe disponer de un hidrocicl&oacute;n de 30 cm de secci&oacute;n cil&iacute;ndrica, operando con un 90 % de eficiencia [33].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Separaci&oacute;n (extracci&oacute;n de carotenoides)</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Las etapas de separaci&oacute;n y extracci&oacute;n de los compuestos de inter&eacute;s son de vital importancia. Para ello, las microalgas deben separarse primero del medio de cultivo en el que se encuentran diluidas y despu&eacute;s extraerse los componentes buscados (carotenoides) de las c&eacute;lulas. Una vez que se haya separado la biomasa del medio de cultivo, se necesita extraer todo el contenido de pigmentos presentes en la fase org&aacute;nica. Para ello se debe adicionar alg&uacute;n solvente y as&iacute; disolver todo el contenido de l&iacute;pido en el mismo. En esta etapa se realiza una primera extracci&oacute;n, agregando como agentes extractores para la obtenci&oacute;n de los carotenoides totales, acetona y hexano en proporciones 1:1 para la acetona y 3:1 para el hexano. Esto se realiza en un tanque con agitador de paletas de 1 m<sup>3</sup>, equipo usado para la mezcla de fluidos con viscosidades del orden de 50 Pa.s, [33].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Es importante destacar que se requiere que los solventes se recuperen para reducir costos de operaci&oacute;n y proteger el medio ambiente. De acuerdo a la bibliograf&iacute;a esta secci&oacute;n estar&aacute; integrada por una unidad de destilaci&oacute;n atmosf&eacute;rica, con enfriadores despu&eacute;s de los condensadores para evitar las p&eacute;rdidas de solvente.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Extracci&oacute;n de ß-caroteno</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Para la extracci&oacute;n de ß-caroteno, la masa de carotenoides separada se trata con hexano como agente extractor l&iacute;quido. Se seleccion&oacute; el hexano por ser el solvente de uso alimentario com&uacute;nmente utilizado con el cual se obtienen mejores rendimientos, sin embargo, se debe poner atenci&oacute;n desde el punto de vista toxicol&oacute;gico y ecol&oacute;gico. Esto ocurre en el mismo tanque agitador. Hay unidades de recuperaci&oacute;n de solventes recomendadas para separar hexano, acetona e isopropanol del agua [34].</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Evaporaci&oacute;n</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Una vez separado el ß-caroteno del resto de los pigmentos, se realiza una evaporaci&oacute;n para extraer el agua de la fase acuosa y obtener solamente el pigmento seco. Para esto es necesario un evaporador tipo marmita (&quot;kettle&quot;), con tiempo de retenci&oacute;n de 6,48 horas, de capacidad de evaporaci&oacute;n de 0,15 a 1,0 kg/h.m<sup>2</sup> de &aacute;rea de calor transferido, por lo que se requiere una unidad de 111 m<sup>2 </sup>&aacute;rea de transferencia [35].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Obtenci&oacute;n de glicerol</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Para la extracci&oacute;n de glicerol a partir de la microalga, la corriente proveniente del separador de las l&iacute;neas principales debe ser sometida a un acondicionamiento para obtener el producto deseado.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Acondicionamiento de la mezcla</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Para la obtenci&oacute;n de glicerol, la fase resultante de la extracci&oacute;n de carotenoides pasa hacia un tanque de chaqueta con agitadores de paleta; la capacidad del tanque es de 10 m<sup>3</sup>. Para acondicionar la mezcla se agrega hidr&oacute;xido de calcio (0,3 kg/kg de biomasa). La mezcla se enfr&iacute;a desde 100&deg;C a 50&deg;C, utilizando agua como medio de enfriamiento.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Filtraci&oacute;n</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La mezcla acondicionada pasa a un filtro tipo Nutsche de modo que las impurezas queden en el medio filtrante y el l&iacute;quido viscoso pasa a la neutralizaci&oacute;n.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Neutralizaci&oacute;n</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La mezcla resultante pasa al tanque de chaqueta con agitadores de paleta, de 1 m<sup>3</sup> para ajustar el pH de 6-7 con una soluci&oacute;n de H<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> al 50 % (1,5 L/kg de Ca(OH)<sub>2</sub>).</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><em><strong>Evaporaci&oacute;n al vac&iacute;o</strong></em></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La disoluci&oacute;n obtenida pasa a una unidad de evaporaci&oacute;n para concentrar la mezcla a extraer. En esta etapa se utiliza un evaporador tipo cazoleta, con una capacidad de 1,5 – 15 kg/h.m<sup>2</sup> de &aacute;rea de calor transferido, tiempo de retenci&oacute;n de 3 horas y de transferencia de 25,06 m<sup>2</sup> [33]. Esta operaci&oacute;n se realiza a una presi&oacute;n de 97 kPa, o sea ligeramente menor que la atmosf&eacute;rica.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Extracci&oacute;n</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">La mezcla resultante de la evaporaci&oacute;n pasa a la unidad de extracci&oacute;n, a&ntilde;adiendo isopropanol (relaci&oacute;n molar isopropanol/mezcla 3:1) y se espera 3 horas. En esta etapa, se reporta un rendimiento del 5 % de glicerol en relaci&oacute;n con la biomasa h&uacute;meda.</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong><em>Evaporaci&oacute;n final</em></strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">El glicerol cantidad t&eacute;cnica obtenido pasa a un evaporador tipo marmita (&quot;kettle&quot;), con tiempo de retenci&oacute;n de 6,48 horas, de capacidad de evaporaci&oacute;n de 0,15 a 1,0 kg/h.m<sup>2</sup> de &aacute;rea de calor transferido, por lo que se requiere un &aacute;rea de transferencia de 66,33 m<sup>2</sup>&aacute;rea de transferencia [33], obteni&eacute;ndose un rendimiento de 95 % [35].</font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">En la <a href="/img/revistas/ind/v29n3/f0302317.gif" target="_blank">figura 3</a> se presenta el esquema del flujo tecnol&oacute;gico propuesto.</font></p>     
<p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Un resumen de los resultados principales del balance de materiales se muestra en la <a href="#t5">tabla 5</a>.</font></p>     <p align="center"><font size="2" face="Verdana"><a name="t5"></a><strong>TABLA  5. RESUMEN DEL BALANCE DE MATERIALES PARA LA OBTENCI&Oacute;N DE ß-CAROTENO Y GLICEROL PARA UN CICLO DE OPERACI&Oacute;N</strong></font></p>      <div align="center">   <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">     <tr>       <td width="328" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="left"><font size="2" face="Verdana">Biomasa h&uacute;meda que entra (kg) </font></p></td>       <td width="130" valign="top">          <div align="left"><font size="2" face="Verdana">2 694,74</font></div></td>     </tr>     <tr>       <td width="328" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">Pigmentos totales (kg) </font></p></td>       <td width="130" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">183,24 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="328" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">ß-caroteno obtenido (kg) </font></p></td>       <td width="130" valign="top">          <div align="left"><font size="2" face="Verdana">77,80</font></div></td>     </tr>     <tr>       <td width="328" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">Alimentaci&oacute;n a la l&iacute;nea de glicerol (kg) </font></p></td>       <td width="130" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">355,71 </font></p></td>     </tr>     <tr>       <td width="328" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">Glicerol obtenido (kg) </font></p></td>       <td width="130" valign="top">    <div align="left"><font size="2" face="Verdana">25,60</font></div></td>     </tr>     <tr>       <td width="328" valign="top">    ]]></body>
<body><![CDATA[<p align="left"><font size="2" face="Verdana">Solventes a recuperar (kg)    <br>       </font><font size="2" face="Verdana">Mezcla acetona-hexano-agua     <br>       </font><font size="2" face="Verdana">Mezcla isopropanol-agua</font></p>       </td>       <td width="130" valign="top">    <p align="left"><font size="2" face="Verdana">    <br>         634,71     <br>       </font><font size="2" face="Verdana">404,21 </font></p>       </td>     </tr>   </table> </div>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana"><strong>Esquema para la extracci&oacute;n de ß-caroteno por fluido supercr&iacute;tico</strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">Otra alternativa de extracci&oacute;n de ß-caroteno es modificar el esquema propuesto sustituyendo las etapas de extracci&oacute;n y evaporaci&oacute;n por la unidad de fluido supercr&iacute;tico (FSC). Con ello se eliminan los consumos de los solventes hexano y acetona. La unidad de FSC consta de un tanque de CO<sub>2</sub> (1), un extractor gas s&oacute;lido (5), un separador para la recuperaci&oacute;n del CO<sub>2</sub> (8), intercambiadores de calor (2, 4, 7 y 9), una bomba (3) y una v&aacute;lvula reguladora (6). En la <a href="#f4">figura 4</a> se presenta el esquema de una unidad FSC [36]. La unidad trabaja a condiciones m&aacute;ximas de 50 MPa y 100 &ordm;C en el extractor. </font></p>     <p align="center"><font size="2" face="Verdana"><a name="f4" id="f4"></a><img src="/img/revistas/ind/v29n3/f0402317.jpg"></font></p>     
<p align="justify"><font size="2" face="Verdana">En la <a href="/img/revistas/ind/v29n3/f0502317.gif" target="_blank">figura 5</a> se presenta el esquema del flujo tecnol&oacute;gico para la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol utilizando una unidad de fluido supercr&iacute;tico.</font></p>     
]]></body>
<body><![CDATA[<p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify"><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><strong>CONCLUSIONES</strong></font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">1. Las condiciones fisicoqu&iacute;micas para Dunaliella sp. (pH 8,65; ox&iacute;geno disuelto 0,06 mg/L; salinidad 242,348 µS/cm; turbidez 40 UNT; f&oacute;sforo total cantidad m&iacute;nima detectable), son favorables para la acumulaci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol, lo que confiere a esta microalga una fuente importante de compuestos de alto valor para la industria cosm&eacute;tica, alimenticia y farmac&eacute;utica. </font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">2. Los resultados de productividad en biomasa como los de carotenos permiten concluir que el cultivo masivo de Dunaliella sp. en tanques abiertos, agitados por paletas permite obtener 15,4 % de ß-caroteno respecto a la biomasa. </font></p>     <p align="justify"><font size="2" face="Verdana">3. El desarrollo del procedimiento permiti&oacute; dimensionar la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol mediante los esquemas tecnol&oacute;gicos presentados con un rendimiento de ß-caroteno de biomasa: 15,4 % y rendimiento de glicerol de la biomasa: 5 % para la extracci&oacute;n convencional y un rendimiento de ß-caroteno de los pigmentos: 70 % y rendimiento de glicerol de la biomasa: 5 % para fluido supercr&iacute;tico. </font></p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify"><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><strong>REFERENCIAS BIBLIOGR&Aacute;FICAS </strong></font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">1. GUEDES, A.; AMARO, H.; MALCATA, F. &quot;Microalgae as Sources of Carotenoids&quot;. <em>Marines Drugs</em>. 2011, 9(1), 625-644.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">2. ACACIO, N. Desarrollo de un procedimiento para la extracci&oacute;n de ß-caroteno y glicerol a partir de Dunaliella sp. en la Salina &quot;Las Cumaraguas&quot;. Tesis en opci&oacute;n al t&iacute;tulo de M&aacute;ster en An&aacute;lisis de Procesos de la Industria Qu&iacute;mica. Universidad de Camag&uuml;ey &quot;Ignacio Agramonte Loynaz&quot;, Cuba, 2014.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">3. VELASCO, R.; VILLADA, H.; CARRERA, J. &quot;Aplicaciones de los Fluidos Supercr&iacute;ticos en la Agroindustria&quot;. <em>Informaci&oacute;n Tecnol&oacute;gica</em>. 2007, 18(1), 53-57.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">4. OLAIZOLA, M. &quot;Commercial development of microalgal biotechnology. From the test tube to the marketplace&quot;. <em>Biomolecular Engineering</em>. 2003, 20, 459-466.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">5. SPOLAORE, P. <em> et al. </em> &quot;Commercial applications of microalgae&quot;. <em>Journal of Bioscience and Bioengineering</em>. 2006, 101(2), 87-96.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">6. ALVES RODR&Iacute;GUEZ, A.; SHAO, A. &quot;The science behind lutein&quot;. <em>Toxicology letters</em>. 2004, 150(1), 57-83.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">7 . DESMETTRE, T.; LECERF, J. M. &quot;Nutrition et degenerescenses maculaires liees a l'age&quot;. <em>EMC-ophtalmologie</em>. 2005, 2(3), 202-217.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">8. MURRAY, R. <em> et al. Calidad de tomate cereza cosechado en tres estados de madurez. </em> Producci&oacute;n vegetal. 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<body><![CDATA[<!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">33. SINNOT, R. K. Chemical Engineering Design. 4 edition. Elsevier: Coulson &amp; Richardson's Chemical Engineering, 2005.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">34. IMPQ. <em>M&aacute;quinas destiladoras</em>, [2014]. Disponible en: <a href="http://www.impq.com.mx/destiladores/" target="_blank">http://www.impq.com.mx/destiladores/</a></font><!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">35. MONTHIEU, C. Estudio t&eacute;cnico econ&oacute;mico de la extracci&oacute;n de los l&iacute;pidos de las microalgas para la producci&oacute;n de biodiesel. Madrid: Universidad Pontificia Comillas, 2010.    </font></p>     <!-- ref --><p align="justify"><font size="2" face="Verdana">36. DOM&Iacute;NGUEZ, L.; PARZANENE, M. Alimentos argentinos. Tecnolog&iacute;as para la industria alimentaria. Ficha No 1. [Disponible en: <a href="http://www.alimentosargentinos.gob.ar" target="_blank">http://www.alimentosargentinos.gob.ar</a>].    </font></p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p align="justify">&nbsp;</p>     <p><font size="2" face="Verdana">Recibido: 24/07/2016    ]]></body>
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