Leida Díaz Machado,1 Isabel Giraldino2 y Lourdes Dávalos Pantoja2
El factor reumatoideo es considerado el responsable fundamental de las interferencias (falsos +) producidas en los inmunoensayos, ya que reacciona inespecíficamente con diferentes epitopos de las moléculas de inmunoglobulina G (IgG). El objetivo de este trabajo fue estudiar la IgG de 7 especies (humana, conejo, burro, carnero, caballo, gallina y ratón, de esta última las subclases IgG1,IgG2a,IgG2b). Se utilizaron partículas de poliestireno de 0,8 µ que fueron recubiertas con 3 concentraciones (0,02, 0,01, 0,05 mg/m2 ) de cada Ig. La reactividad se evaluó frente a 6 concentraciones de factor reumatoideo (1 000, 500, 250, 64, 16, 8 UI ). Se evidenció en todos los casos que la reactividad disminuye a medida que baja la concentración de recubrimiento y que el orden de reactividad decreciente fue: humana, conejo, burro, carnero y caballo, y para las IgG murinas fue IgG1, IgG2a e IgG2b. La IgG de gallina no reaccionó frente al factor reumatoideo, la cual constituyó la especie ideal en la elaboración de reactivos de látex para evitar las interferencias del factor reumatoideo.
DeCS: FACTOR REUMATOIDE; INMUNOGLOBULINA; INMUNOENSAYO; MICROESFERAS.
El factor reumatoideo (FR) se define como autoanticuerpos dirigidos contra determinantes antigénicos del fragmento Fc de las inmunoglobulinas G (IgG) de muchas especies.1 Este se encuentra elevado fundamentalmente en pacientes con artritis reumatoidea, aunque también se eleva en otras enfermedades reumáticas, infecciones, enfermedades hepáticas, así como en sujetos sanos.2-5
El FR es considerado el responsable fundamental de las interferencias (falsos positivos) producidas en los inmunoensayos, ya que generalmente reacciona inespecíficamente con diferentes epítopos de las moléculas de IgG.6,7
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Los resultados indican que las especies humana, conejo, burro, carnero y caballo son reactivas en el rango de concentraciones de FR estudiadas. La especie más reactiva resultó ser la humana. La segunda especie altamente reactiva es el conejo; y las inmunoglobulinas de carnero y caballo reaccionan con menor intensidad (tabla 1 ).
TABLA 1. Reactividad del FR con partículas de látex recubiertas con inmunoglobulinas de diferentes especies animales
Recubrimiento(mg/m2) | 0,02 | 0,01 | 0,005 | ||||
C | S/C | ]]> C | S/C | C | S/C | ||
HUMANA | UI FR | ]]> | |||||
1 000 | 4+ | 3+ | 3+ | 2+ | 2+ | 1+ | |
500 | ]]> 4+ | 3+ | 3+ | 2+ | 2+ | 1+ | |
250 | 4+ | 3+ | 3+ | ]]> 2+ | 1+ | 1+ | |
64 | 4+ | 3+ | 3+ | 2+ | 1+ | - | |
]]> 16 | 3+ | 2+ | 2+ | 1+ | 1+ | - | |
8 | 2+ | 1+ | ]]> 2+ | 1+ | - | - | |
CONEJO | 1 000 | 3+ | 3+ | 3+ | 2+ | ]]> 1+ | - |
500 | 3+ | 3+ | 2+ | 1+ | 1+ | - | |
250 | ]]> 3+ | 2+ | 2+ | 1+ | - | - | |
64 | 3+ | 2+ | 1+ | ]]> 1+ | - | - | |
16 | 2+ | 1+ | 1+ | - | - | - | |
]]> 8 | 1+ | - | - | - | - | - | |
BURRO | 1 000 | 3+ | ]]> 3+ | 3+ | 2+ | - | - |
500 | 3+ | 2+ | 2+ | 1+ | ]]> - | - | |
250 | 2+ | 1+ | 1+ | - | - | - | |
64 | ]]> 1+ | 1+ | - | - | - | - | |
16 | 1+ | - | - | ]]> - | - | - | |
8 | - | - | - | - | - | - | |
]]> CARNERO | 1 000 | 3+ | 3+ | 2+ | 2+ | - | - |
500 | 3+ | ]]> 2+ | 2+ | 1+ | - | - | |
250 | 3+ | 1+ | 2+ | 1+ | ]]> - | - | |
64 | 2+ | 1+ | 1+ | - | - | - | |
16 | ]]> 1+ | - | - | - | - | - | |
8 | - | - | - | ]]> - | - | - | |
CABALLO | 1 000 | 3+ | 3+ | 3+ | 2+ | - | ]]> - |
500 | 3+ | 2+ | 2+ | 1+ | - | - | |
250 | 2+ | ]]> 1+ | 1+ | - | - | - | |
64 | 1+ | 1+ | - | - | ]]> - | - | |
16 | 1+ | - | - | - | - | - | |
8 | ]]> - | - | - | - | - | - |
C: centrifugado; S/C: sin centrifugar.
Los anticuerpos monoclonales a pesar de sus innumerables ventajas, no están exentos de las reacciones inespecíficas que causa el FR. Se determinó que las distintas clases de IgG monoclonales murinas muestran grados de reactividad diferentes frente al FR y en general son menos reactivas que las IgG policlonales (tabla 2).
TABLA 2. Estudio de la reactividad del FR con partículas de látex recubiertas con diferentes subclases de monoclonales murinos
]]> Recubrimiento(mg/m2) | 0,02 | 0,01 | 0,005 | ||||
C | S/C | C | S/C | ]]> C | S/C | ||
IgG2a | UI FR | ]]> | |||||
1 000 | 2+ | 2+ | 2+ | 2+ | - | - | |
500 | 2+ | ]]> 2+ | 2+ | 1+ | - | - | |
250 | 2+ | 1+ | 2+ | 1+ | ]]> - | - | |
64 | 2+ | 1+ | 1+ | 1+ | - | - | |
16 | ]]> 1+ | - | - | - | - | - | |
8 | - | - | - | ]]> - | - | - | |
IgG1 | 1 000 | 2+ | 1+ | 2+ | 1+ | - | ]]> - |
500 | 2+ | 1+ | 1+ | - | - | - | |
250 | 1+ | ]]> 1+ | - | - | - | - | |
64 | 1+ | - | - | - | ]]> - | - | |
16 | - | - | - | - | - | - | |
8 | ]]> - | - | - | - | - | - | |
IgG2b | 1 000 | 2+ | 1+ | ]]> 1+ | 1+ | - | - |
500 | 2+ | 1+ | 1+ | 1+ | - | ]]> - | |
250 | 1+ | - | - | - | - | - | |
64 | - | ]]> - | - | - | - | - | |
16 | - | - | - | - | ]]> - | - | |
8 | - | - | - | - | - | - |
C: centrifugado; S/C: sin centrifugar.
]]>La gallina fue la única especie de las cinco estudiadas que no reaccionó frente a las diferentes concentraciones utilizadas (tabla 1).
En el análisis del comportamiento de la interferencia teniendo en cuenta la cantidad que se absorbe físicamente sobre la partícula de látex y la concentración de las inmunoglobulinas en solución, quedó evidenciado que la reactividad disminuye con la disminución de la concentración de recubrimiento así como con la presencia de anticuerpos libres.
Existe un fuerte compromiso conformacional entre el FR y las inmunoglobulinas que justifican las diferencias en la reactividad que se encontraron entre las inmunoglobulinas de las distintas especies estudiadas.8
La reacción de aglutinación inespecífica debido al FR que ocurre en los sistemas de látex se basa fundamentalmente en la modificación que sufren las inmunoglobulinas durante el proceso de adsorción a las microesferas de látex. ]]>
The rheumatoid factor is considered as the fundamental responsible for the interferences (false +) produced in the immunoassays, since it reacts unspecifically with different epitopes of the molecules of immunoglobulin G (IgG). This paper was aimed at studying the IgG from 7 species (human, rabbit, donkey, lamb, horse, hen and mouse; and of the latter the subclasses IgG1, IgG2a, IgG2b). Particles of polystyrene of 0.8 m that were covered with 3 concentrations (0.02, 0.01. 0.05 mg/m2) of every 1 g were used. Reactivity was evaluated against 6 concentrations of rheumatoid factor (1 000, 500, 250, 64, 16, 8 UI). In all cases, it was demonstrated that the reactivity decreases as the covering concentration diminishes and that the decreasing reactivity order was: human, rabbit, donkey, lamb, and horse; whereas for the murine IgG it was IgG1, IgG2a and IgG2b. The hen IgG did not react against the rheumatoid factor. It was the ideal species to make latex reagents to avoid the interferences of the rheumatoid factor.
Subject headings: RHEUMATOID FACTOR; IMMUNOGLOBULINS; IMMUNOASSAY; MICROSPHERES.
Recibido: 30 de abril de 2003. Aprobado: 29 de mayo de 2003.
Lic. Leida Díaz Machado. Empresa de Producción de Biológicos "Carlos J. Finlay". Infanta No. 1162 entre Manglar y Línea del Ferrocarril, municipio Centro Habana, Ciudad de La Habana, CP 10300, Cuba.
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1Licenciada en Bioquímica.
2Master en Bioquímica de las Proteínas.