Descriptores DeCS: ANTICUERPOS MONOCLONALES/inmunología; GANGLIOSIDOS/inmunología; REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO; CULTIVO DE TEJIDO; MOLECULAS DE ADHESION CELULAR/inmunología; EPITOPES; ADHERENCIA CELULAR/inmunología.
El término ganglíoidos fue introducido por Klenk en 1942 para designar unos lípidos del sistema nervioso con localización predominante en células ganglionares y en cuya composición hay una molécula de ceramida anclada en la membrana celular y diferentes monosacáridos, entre los que está el ácido siálico, hacia el comportamiento extracelular.1,2
Estos glicolípidos complejos se encuentran en la superficie externa de la mayoría de las membranas celulares y forman parte de la identidad inmunológica de las células de mamíferos. Estas moléculas participan en diversos tipos de señalización celular en procesos tales como proliferación, diferenciación, migración y apoptosis.3,4 La transducción de la señal de los factores de crecimiento epidérmico y plaquetario que se acompaña de fosforilación proteica, es modulada por los gangliósidos GM3 y GM1, respectivamente.5
Se conoce que el perfil carbohidratídico de la superficie celular cambia no sólo durante el desarrollo normal sino también en los desórdenes del comportamiento celular que se asocian a procesos tumorales.5,6 Las modificaciones en la composición gangliosídica de las células tumorales pueden ser la causa de algunas interacciones anormales entre dichas células y su ambiente. Algunos gangliósidos se independizan de las células tumorales y pueden modificar la inmunidad del hospedero, contribuyendo de este modo al desarrollo del tumor.6 Hay evidencias crecientes de que los gangliósidos desempeñan su papel en el crecimiento tumoral, progresión y metástasis.7
Numerosos investigadores en la búsqueda de posibles marcadores para el diagnóstico y pronóstico del cáncer han comparado las concentraciones de gangliósidos del tejido tumoral con las de sus homólogos normales y las mismas se encontraron incrementadas a favor de los primeros.8-10
El propósito del presente trabajo es conocer el reconocimiento tisular de 3 anticuerpos monoclonales (AcMs) dirigidos contra moléculas de gangliósidos, como parte del estudio de sus posibilidades diagnósticas y/o terapéuticas.
MÉTODOS
Muestras de tejidos normales del adulto se obtuvieron en el transcurso de la hora siguiente al retiro del soporte vital después de confirmado el diagnóstico de muerte encefálica. El consentimiento informado del donante (cuño en el carnet de identidad) fue ratificado por la familia.
Los fragmentos fueron congelados en nitrógeno líquido y posteriormente conservados a -70 °C. Se realizaron cortes de 4 m en un criostato y se desarrollaron 2 protocolos de fijación con paraformaldehído, después de cortar y antes del experimento, hasta encontrar la mejor preservación del tejido con la menor afectación antigénica. Los tejidos fueron fijados en paraformaldehído durante 2 min antes de realizar el experimento. ]]>
El ajuste del tiempo de incubación y de la concentración en la que los 3 sobrenadantes de cultivo alcanzan el mejor contraste entre el reconocimiento específico y el fondo (background) fueron realizados en cerebro fetal para los AcMs A3 y E1 y en tumor de mama para el P3. Los sobrenadantes se trabajaron puros y se incubaron durante 2 h. El sistema de detección empleado fue el complejo avidina-biotina peroxidasa (Vectastain, CA) y el cromógeno aminoetilcarbazol. Los tiempos de incubación tanto para el anti-ratón biotinilado como para el complejo fueron de 1h.El control positivo para cada experimento fueron cortes de piel a los que se les aplicó el AcM ior/r3egf (CIMAB,S.A.) mientras que para el negativo en un espécimen de cada muestra la primera incubación se realizó con tris salino al 1 % en lugar del AcM primario. Cortes de tejido nervioso y cáncer de mama sirvieron de controles positivos para los sobrenadantes.
ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS
En todos los tejidos donde se observó inmunotinción (tabla) las intensidades oscilaron entre leve a moderada y el reconocimiento tisular no fue homogéneo.
Tejidos | | | |
Estómago | 2(3) +submucosa | 2(3) | 0(3)+submucosa |
Intestino delgado | 3(3) ++epitelio ++submucosa | 3(3) ++epitelio | 3(3) +epitelio |
3(3) ++submucosa | 3(3) ++submucosa ]]> +++ganglios | ||
Intestino grueso | 2(3) ++epitelio ++submucosa | 2(3) ++epitelio ++submucosa | 2(3) +epitelio ++submucosa |
Pulmón | 2(4) +tejido conectivo +epitelio bronquios | 2(4) +tejido conectivo +epitelio bronquios | 2(4) +tejido conectivo |
Tráquea | 1(1) +epitelio | 1(1) +epitelio | 1(1) +tejido conectivo |
Riñón | 1(1) ++secreciones tubulares ++secreciones | 1(1) +epitelio túbulos | 0(1) |
Piel y epitelio glandular | 1(2) ++melanocitos | 0(2) | 0(2) |
Hígado | 0(2) | 1(2) +pared vaso | 0(2) |
Próstata | 0(1) | 1(1) ++epitelio | 0(1) |
Téstículo | 0(1) | 0(1) | 0(1) |
Útero | 0(1) | 0(1) | 0(1) |
Ovario | 0(1) | 0(1) | 0(1) |
Adrenales | 0(3) | 0(3) | 0(3) |
Corazón | 0(4) | 0(4) | 0(4) |
Músculo esquelético | 0(3) | 0(3) | 0(3) |
Bazo | 0(2) | 0(2) | 0(2) |
Páncreas | 0(1) | 0(1) | 0(1) |
Vejiga | 0(1) | 0(1) | 0(1) |
Ando (1983) al estudiar la presencia de gangliósidos en el sistema nervioso reportó que estas moléculas no están distribuidas de manera uniforme en la superficie celular sino formando acúmulos (clusters) que rodean a las proteínas ancladas en la membrana.2 La homogeneidad del marcaje de los melanocitos de la piel (figura 1) y de los ganglios autónomos del intestino delgado con el AcM A3, pudiera ser compatible con una distribución más uniforme del antígeno reconocido por este anticuerpo en estos tejidos. ]]>
La imposibilidad de conseguir muestras frescas de tejido nervioso por razones éticas, nos han impedido buscar la presencia de los antígenos A3, E1 y P3 en este tejido. Hay reportes que confirman, por cromatografía de capa fina, la presencia de gangliósidos en tejidos y las mayores concentraciones se reportan en el nervioso (>10 %) mientras que en otros tales como hígado, bazo y riñón se estima sean inferiores a 5 %.10,12
La ausencia de inmunorreacción en algunos tejidos (tabla) puede ser interpretada como no presencia de los antígenos en dichos tejidos pero también ser resultado de concentraciones que estén por debajo del límite de resolución de esta técnica, lo que hace imposible la visualización de la reacción.
CONCLUSIONES
2. Los antígenos E1 y A3 tienen una localización preferentemente epitelial.
3. El antígeno P3 es muy escaso o pudiera estar ausente en casi todos los tejidos estudiados.
Subject headings: ANTIBODIES, MONOCLONAL/immunology; GANGLIOSIDES/ immunology; ANTIGEN-ANTIBODY REACTIONS; TISSUE CULTURE; CELL ADHESION MOLECULES/ /immunology; EPITOPES; CELL ADHESION/immunology. ]]>
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICASDra. Mayra A. Gari Calzada. Masó 380, apartamento 2, entre Pedro Pérez y General Suárez, municipio Cerro, Ciudad de La Habana, Cuba.