Abstract

UMANA, Rodolfo et al. Evaluación de cuatro métodos de extracción de ARN viroide para el diagnóstico molecular de CEVd en Citrus limon mediante RT-PCR, Dot blot y Northern blot. Biotecnol Apl [online]. 2013, vol.30, n.2, pp. 131-136. ISSN 1027-2852.

En el desarrollo de metodologías moleculares diagnósticas en variedades cítricas propensas a infección viroide, se precisa la extracción eficiente de ARN, siguiendo criterios de concentración y pureza. Los contaminantes remanentes pueden afectar la detección según la herramienta molecular escogida. Esta condición se analiza a partir del espectro de absorción del ARN; mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) y por los niveles de intensidad de las señales de Northern blot y Dot blot, en términos de respuesta analítica/sensibilidad. Se evaluaron cuatro métodos de extracción de ARN, por sus efectos sobre la detección de presencia/ausencia del Citrus Exocortis Viroid (CEVd) en Citrus limon mediante análisis moleculares diagnósticos: 1) extracción viroide convencional (EVC); 2) fenol/tiocianato de guanidina (FTG); 3) SDS/acetato de potasio (SAP); y 4) formaldehído/SSC (FS). Los valores del tejido de floema estuvieron entre 7500 ng/µL y 1200 ng/µL y los rangos entre 1.3 y 2.

Keywords : CEVd; diagnóstico; Northern blot no radiactivo; RT-PCR; viroides cítrico.

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