Abstract

DEBESA PADILLA, Aymé  and  HERNANDEZ BETANCOURT, Oscar. Estandarización de un ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en el lupus eritematoso sistémico. Rev Cubana Invest Bioméd [online]. 2012, vol.31, n.4, pp. 467-479. ISSN 0864-0300.

Introducción: los anticuerpos anti-ADN doble cadena son un marcador serológico diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). El ensayo inmunoenzimático en fase sólida es una técnica rápida y rentable para su detección. Objetivo: estandarizar un ELISA que detecte anti ADN doble cadena para el diagnóstico del lupus. Métodos: los pasos que se siguieron para la estandarización incluyeron la preparación de controles, la sensibilización de la fase sólida, la selección de los amortiguadores y conjugado del ensayo, la evaluación de las condiciones de reacción y la determinación del nivel de corte. Además se realizó el estudio de inespecificidades. Se probaron 5 tipos de placas de poliestireno y se compararon ADN plasmídico de E.coli, pUC19 y ADN genómico humano como antígenos de recubrimiento. Se evaluó el efecto de la poli-L-lisina y la irradiación de la placa con luz ultravioleta, en la fijación del antígeno. El valor de corte del ensayo se determinó por el método del valor límite. Resultados: se observó disociación del antígeno cuando no se utilizó poli-L-lisina en el pretratamiento de la placa y la irradiación con luz UV no favoreció la unión del ADN a la fase sólida. No se encontraron diferencias significativas (p=0,710) entre ambos ADN, en el recubrimiento. El valor de corte (K=3) permitió clasificar como positivas 28 muestras (63,6 %) de pacientes con LES. Conclusiones: el método estandarizado, con el empleo de ADN plasmídico, permitió la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en pacientes con lupus.

Keywords : ADN; ensayos inmunoenzimáticos; ELISA; estandarización.

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