Abstract

AGUERO, J.A et al. CLONAJE MOLECULAR Y EXPRESIÓN DEL GEN QUE CODIFICA PARA LA PROTEÍNA ESTRUCTURAL DEL VIRUS DE LA ENFERMEDAD INFECCIOSA DE LA BOLSA, VP3. Rev Salud Anim. [online]. 2007, vol.29, n.1, pp. 39-47. ISSN 0253-570X.

El virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa (IBDV), un miembro de la familia Birnaviridae, es un virus ARN de doble cadena, capaz de causar considerables pérdidas económicas al inducir destrucción de la bolsa, inmunosupresión y alta mortalidad en pollos jóvenes. La cápsida del virus está formada por las proteínas estructurales VP2 y VP3. Se amplificó por PCR el gen vp3 (870pb), a partir del vector pcDNA3-Poly que contiene el gen que codifica para la poliproteína (pVP2-VP4-VP3) del virus. El producto de PCR se clonó en el plásmido pQE30 y se expresó en la cepa M15 de E. coli a altos niveles como una proteína de fusión con una cola de hexahistidina. Así se obtuvo una proteína antigénicamente activa, como se demostró por Western-Blot con un anticuerpo policlonal contra el virus, con un peso molecular aproximado de 32kDa. Se describió un protocolo para extraer la proteína en forma soluble, acoplado a un eficiente sistema de purificación en un solo paso, basado en la cromatografía de afinidad por metales inmovilizados, mediante el cual se obtuvo un producto con un 90% de pureza. En conejos se generaron sueros de altos títulos de anticuerpos contra la VP3 recombinante capaces de reconocer tanto a la proteína recombinante, como a la proteína nativa del virus. Son necesarios experimentos posteriores para evaluar el potencial de estos anticuerpos en el monitoreo de la expresión de la VP3 o la poliproteína del virus en otros sistemas heterólogos.

Keywords : VP3; IBDV; cápsida; proteína recombinante; IMAC.

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