Abstract

ROJAS, Laritza et al. Evaluación de la proteólisis en células aisladas vivas de Plasmodium falciparum aisladas durante los estádios asexuales sanguíneos. Rev Cubana Med Trop [online]. 2019, vol.71, n.2, e350.  Epub Sep 30, 2019. ISSN 0375-0760.

Se ha demostrado que las proteasas desempeñan funciones vitales en la infección por Plasmodium falciparum, y por lo tanto se consideran dianas en la elaboración de nuevos medicamentos terapéuticos. El objetivo del estudio era describir el perfil de actividad proteolítica específica de todas las etapas sanguíneas de parásitos aislados de P. falciparum con vistas a explorar nuevas opciones antimaláricas. Con ese propósito, utilizamos el sustrato fluorogénico Z-Phe-Arg-AMC (Z: carbobenzoxi, AMC: 7-amino-4-metilcumarina) e inhibidores clásicos para las diferentes clases de enzimas proteolíticas, tales como el fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), 1,10-fenantrolina, pepstatina A y E64 para estudiar los perfiles de inhibición. Como se esperaba, debido a la elevada actividad metabólica de las etapas de madurez, el sustrato fue degradado mayormente en el trofozoíto y el esquizonte, con actividad específica ~ 20 veces superior a la de las etapas tempranas (merozoíto/ anillos). Los principales actores en la hidrólisis del sustrato fueron las cisteínas proteasas, lo que fue confirmado por la inhibición completa de la hidrólisis con la adición de E64. La actividad proteolítica también fue inhibida en presencia de PMSF en todas las etapas excepto el esquizonte. Sin embargo, la inhibición del PMSF fue resultado de una interacción inespecífica con las cisteínas proteasas, según lo demuestra la reversión de la inhibición con el ditiotreitol (DTT), lo que indica que la actividad de la serina proteasa es muy baja o inexistente. Que sepamos, este es el primer informe dirigido a describir el perfil proteolítico de parásitos aislados de P. falciparum en todas las etapas del ciclo eritrocítico. Los resultados y el protocolo que aquí se describen pueden ser útiles para dilucidar la acción específica de los medicamentos inhibidores de proteólisis en cada etapa, así como contribuir al desarrollo de compuestos antimaláricos con actividad inhibidora de la proteasa.

Keywords : P. falciparum; proteólisis; células vivas; cisteínas proteasas; medicamentos antimaláricos.

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