Introducción
Tanto la placenta humana como el cordón umbilical, fueron considerados por muchos años un material de desecho posparto. Sin embargo, a partir de las investigaciones realizadas en la década del 70 del siglo XX, las células progenitoras hematopoyéticas (CPH) provenientes de las unidades de sangre de cordón umbilical (USCU) se utilizan en la terapia de diversas enfermedades hematológicas, así como en enfermedades quimio y radiosensibles.1
Durante los últimos años, las CPH provenientes de las USCU se han aprovechado en terapia celular por las ventajas que presentan sobre las CPH de médula ósea y sangre periférica. No obstante, el poco volumen que se obtiene resulta en una pequeña cantidad de células CD34+; su uso se restringe, casi exclusivamente, a pacientes pediátricos o con peso corporal menor de 35 kg. Aunque se han desarrollado técnicas para superar esta limitación, como el uso de CPH proveniente de dos cordones umbilicales y la expansión celular ex vivo, estas alternativas se encuentran aún en investigación.2,3,4,5
En los últimos tiempos, el cordón umbilical se ha convertido en un elemento de interés para la medicina regenerativa, pues representa la unión entre el feto y la madre durante el embarazo, interviene en la nutrición fetal y permite resistir las presiones intrauterinas y las tracciones fetales.6,7
Se ha demostrado que el cordón umbilical de los recién nacidos tanto a término como pretérmino, contiene un número determinado de CPH inmaduros y comprometidos, resultado de la hematopoyesis fetal, que es el proceso fisiológico por el cual se produce la maduración de todos los tipos celulares que componen la sangre. Su funcionamiento correcto permite la formación de células responsables del transporte de oxígeno, de la coagulación sanguínea y la inmunidad.8
Las células madre (CM) presentes en la circulación fetal tienen características diferenciales con respecto a las del hígado y médula ósea fetales; su volumen se mantiene elevado durante toda la vida intrauterina hasta el momento del nacimiento.9 Las CM cumplen con dos propiedades fundamentales: son capaces de autorrenovarse y diferenciarse en múltiples tipos celulares hasta llegar a especializarse; además, son consideradas como CM adultas pluripotenciales. El proceso de diferenciación para adquirir compromiso de estirpe está condicionado por el microambiente en que se encuentran.9,10,11
La sangre del cordón umbilical (SCU) es una fuente de diversos tipos celulares, entre ellos las células mononucleares, las que se incluyen: los monoblastos, los linfoblastos, los linfocitos, los monocitos y los precursores eritrocíticos, proeritroblastos y eritroblastos.12,13.,14)
La obtención de células mononucleares constituye una técnica promisoria en las investigaciones biomédicas. El objetivo de este estudio es caracterizar morfológicamente la sangre del cordón umbilical para terapia regenerativa en recién nacidos del Hospital Universitario Ginecobstétrico “Ana Betancourt de Mora”.
Métodos
Se realizó un estudio observacional analítico transversal en el Centro de Inmunología y Productos Biológicos de Camagüey, entre enero y diciembre de 2017. Se evaluaron 35 muestras de USCU de recién nacidos; estos fueron partos eutócicos y sus madres no tuvieron procesos de enfermedades infecciosas concurrentes. Se obtuvo el consentimiento informado de las madres.
Las muestras fueron obtenidas en el Hospital Universitario Provincial “Ana Betancourt de Mora”. Estas fueron colectadas luego de pinzar el cordón umbilical y antes de producirse el alumbramiento. Se depositaron 10 mL de sangre venosa en tubo heparinizado. Una vez homogenizada la sangre con el anticoagulante y rotulado el tubo, se colocó en una gradilla de metal y previa conservación en cadena de frío fue trasladado hasta el laboratorio para su procesamiento final.
Para realizar el conteo diferencial de las células presentes en la sangre, obtención del botón celular y la coloración con azul tripán para determinar la viabilidad celular, se siguió la metodología descrita en los procedimientos del sistema de gestión de la calidad de la institución, que norma la realización de estos procederes.
Se determinaron los estadígrafos de tendencia central y dispersión de la morfología celular de la sangre del botón celular aislado y del cordón umbilical. Se utilizó la técnica de componentes principales para crear un constructo que incluyó las variables: conteo y la viabilidad celular en la sangre del cordón y del botón celular aislado. La información se organizó en una base de datos para su procesamiento con el paquete estadístico SPSS versión 21 para Windows. Los datos se procesaron con un nivel de confiabilidad del 95 %. Para el análisis de los resultados se empleó la estadística descriptiva e inferencial. Se presentaron los datos en tablas y gráficos.
Resultados
El mayor recuento del tipo de células mononucleares procedentes de la SCU observado fue de linfocitos, con una media de 0,46 x 109/L; con una desviación estándar de 0,10 y recuento mínimo de 0,23 y máximo de 0,61 x 109/L. Le siguieron las células linfomonocitarias con un promedio de 0,02 x 109/L, desviación estándar de 0,01 y recuento mínimo de 0,01 y máximo de 0,05 109/L; las células de tipo mieloblastos, linfoblastos presentaron promedios de 0,01 y 0 x 109/L (Tabla 1).
Tipo de célula mononuclear | Media (x109/L) | Desviación estándar | Mínimo | Máximo |
---|---|---|---|---|
Linfocitos | 0 ,46 | 0 ,10 | 0 ,23 | 0 ,61 |
Monocitos | 0 ,02 | 0 ,04 | 0,00 | 0 ,07 |
Mieloblastos | 0 ,01 | 0 ,01 | 0 ,00 | 0 ,06 |
Monoblastos | 0 ,00 | 0 ,01 | 0 ,00 | 0 ,02 |
Linfoblastos | 0 ,01 | 0 ,01 | 0 ,00 | 0 ,03 |
Linfomonocitarias | 0 ,02 | 0 ,01 | 0 ,01 | 0 ,05 |
En el conteo diferencial de las células de la SCU predominaron los neutrófilos y linfocitos, con medias de 0,50 y 0,46 x 109/L, respectivamente; no presentaron diferencias significativas (Tabla 2).
Tipo celular | Media (109/L) | Desviación estándar | Mínimo | Máximo |
---|---|---|---|---|
Polimorfonuclear neutrófilo | 0 ,50 | 0 ,08 | 0 ,38 | 0 ,70 |
Linfocito | 0 ,46 | 0 ,10 | 0 ,23 | 0 ,61 |
Monocito | 0 ,02 | 0 ,02 | 0 ,00 | 0 ,07 |
Polimorfonuclear eosinófilo | 0 ,02 | 0 ,02 | 0 ,00 | 0 ,08 |
Polimorfonuclear basófilo | 0 ,00 | 0 ,00 | 0 ,00 | 0 ,02 |
Stab | 0 ,00 | 0 ,01 | 0 ,00 | 0 ,05 |
De las células mononucleares presentes en el botón, fueron más frecuente los linfocitos, con 0,59 x 109/L y una desviación estándar de 0,11; mientras que en el recuento de monocitos se observó un promedio de 0,004 x 109/L, con desviación estándar de 0,13 (Tabla 3).
Discusión
La sangre contenida en la vena umbilical presenta células precursoras, las cuales dan lugar a células maduras que se encuentran en la circulación fetal. Por esta razón, es frecuente encontrar diversos tipos celulares como linfoblastos, mieloblastos, neutrófilos, eosinófilos, linfocitos, monocitos en diferentes proporciones, que evidencian el grado de inmadurez inmunológica existente en el período neonatal.15,16,17
La obtención de células mononucleares viables a través de la vena umbilical, constituye una técnica promisoria en las investigaciones biomédicas. En la cuantificación de las células mononucleares se incluyen los monoblastos, los linfoblastos, los mieloblastos, los linfocitos, los monocitos y las células linfomonocitarias encontradas en las muestras de SCU, como resultado de tres procesos importantes: hematopoyesis, migración celular y circulación fetal.16,17,18,19
El número absoluto de neutrófilos segmentados se eleva tanto en los lactantes a términos como en los prematuros en las primeras 24 h de vida. Los granulocitos segmentados son las células predominantes en los primeros días de vida. Cuando sus cifras descienden, el linfocito se convierte en la célula más numerosa, que permanece así durante los primeros cuatro años de vida, lo cual explica el comportamiento de este conteo diferencial.16
El comportamiento acorde con la distribución normal de estas células sanguíneas, cuya proporción está en correspondencia con las funciones que desempeñan en el organismo, como se demuestra en los estudios de Borstein en España, evidencia que existe un mayor promedio de linfocitos con respecto a los monocitos.18
Estudios procedentes de bancos de SCU y la universidad chilena, describen que en un mL de sangre del cordón umbilical hay aproximadamente 8 000 progenitores de eritrocitos, de 13 a 24 000 progenitores mieloides, y entre 1 000 y 10 000 células madre pluripotenciales.20,21
El comportamiento de los monocitos y los eosinófilos es similar al que se describe en la literatura, con un promedio de 0,02 en ambos casos. Estos resultados coinciden con lo observado por Amo,22 que refiere que la fórmula leucocitaria se comportó de la siguiente manera: granulocitos (51 ± 8 %), linfocitos (40 ± 7 %), monocitos (5 ± 4 %), y un 4 % de otros tipos celulares, fundamentalmente eosinófilos.
Los resultados relacionados con el recuento celular del frotis del botón, según el tipo de célula mononuclear, coinciden además con los obtenidos por Calatrava Ferreras, en un estudio sobre células madre de cordón umbilical en el tratamiento de ataxias cerebelosas en Madrid.23) En dicha investigación la fracción mononuclear se caracterizó a través del estudio de la expresión de antígenos hematopoyéticos y neurales durante cultivo, sin la adición de factores de crecimiento y citoquinas; se obtuvo una fracción de células adherentes, la mayoría linfocitos que expresaban antígenos hematopoyéticos.
En resumen, en la SCU obtenida en el Hospital Universitario Ginecobstétrico “Ana Betancourt de Mora” de Camagüey predominaron los linfocitos entre las células mononucleares, tanto en la sangre del cordón umbilical como en el botón celular aislado. En el conteo diferencial fue mayor el número de polimorfonucleares neutrófilos.