ARTICULOS ORIGINALES

 

Aplicación de la técnica de inmunoperoxidasa para la titulación de cepas del virus Dengue 1.

 

Use of the immunoperoxidase technique for the titration of a Dengue 1 virus strain.

 

Alicia Aguilar1, Nevis Amin1, Luis Morier2 , Arturo Talavera1, Ela María Pérez1.

1 Instituto Finlay. Centro de Investigación Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.
E-mail:[e-mail]

2 Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (IPK). Ciudad de La Habana, Cuba.

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RESUMEN

La aplicación de la técnica de inmunoperoxidasa para titular virus Dengue ha permitido eliminar algunas de las desventajas que presenta, para este mismo fin, la técnica de formación de placas en cultivos celulares, catalogada como un método fastidioso debido a los múltiples factores que influyen en la formación de las placas. En la literatura consultada se reporta la disminución del tiempo para la obtención de los resultados como la principal ventaja de la primera, pero no datos sobre su precisión. Teniendo esto en cuenta nos propusimos aplicar dicha técnica para titular virus Dengue 1. Se siguió el Procedimiento descrito para realizar la inmunoperoxidasa modificando el tiempo de fijación de las células infectadas de 5, 7 y 10 días y el bloqueo con TSF-Tween 20- SAB 1% durante una hora. La dilución de trabajo para el suero humano utilizado fue de 1/500 y para el líquido ascítico hiperinmune de ratón, contra Dengue 1 fue de 1/100; para los conjugados peroxidasa anti humano y anti ratón empleados, resultaron útiles diluciones de 1/100 y 1/200 para el primero y 1/500 y
1/1000 para el segundo. Se evidenciaron los focos de infección viral, al 7° y 10° días, pero no al 5º. Los títulos virales obtenidos por dos operadores presentaron un Coeficiente de Variación < 30%. Se seleccionó el 7º día para titular el virus, lográndose reducir el tiempo requerido para obtener los resultados con la técnica de placas. No hubo diferencias significativas entre los títulos virales calculados por ambas técnicas.

Palabras claves: Dengue, inmunoperoxidasa.

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ABSTRACT

The use of the immunoperoxidase technique for the titration of Dengue virus has eliminated some of the disadvantages of plaque assay in cell culture for titration, which is considered a fastidious method due to the number of factors involved in the plaque formation. The time reduction to obtain results, is the principal advantage of the immunoperoxidase technique reported in the literature, but nothing is said about its precision. Our purpose was to test the immunoperoxidase technique to titrate Dengue 1 virus in our laboratory. The procedure described for this technique was followed, modified by the fixation of infected cells after 5, 7, and 10 days of incubation and by blocking with TSF-Tween 20- SBA 1% during one hour. The working dilution for the positive human sera was 1/500 and for the polyclonal ascitic fluid (AF) against Dengue 1 obtained in mice, 1/100. The useful dilutions for the anti human and anti mouse peroxidase conjugates were 1/100 and
1/200 for the first and 1/500 and 1/1000 for the second. In these conditions, it was possible to evidence the characteristic foci produced by Dengue 1 virus and to quantify it on the 7th and 10th days, but not on the 5th. The Variation Coefficient was < 30%. The 7th day was chosen as optimum to titrate the virus, leading us to titration faster than by the plaque method. Significant differences were not found between the viral titres obtained by both techniques.

Keywords: Dengue, immunoperoxidasa.

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