ARTÍCULO ORIGINAL

 

Evaluación del extracto fluido de Pluchea carolinensis (Jacq.) G. Don. por el método de clases de toxicidad en ratas

Evaluation of fluid extract from Pluchea carolinensis (jacq.) G. Don. by the toxicity class method in rats

María Elena Arteaga Pérez^I; Armando L. Payo Hill,^II Consuelo González Triana,^III Ana M. Bada Barro^I; Bárbara O. González Navarro^I; Ailemys Curbelo Valiente^IV

^I Máster en Ciencias en Toxicología Experimental. Investigadora Auxiliar. Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB). La Habana, Cuba.
^II Máster en Ciencias en Química Orgánica. Instituto de Ecología y Sistemática (IES). Capdevila. Ciudad de La Habana, Cuba.
^III Máster en Ciencias en Química. Investigadora Auxiliar. IES. Capdevila. Ciudad de La Habana, Cuba.
^IV Licenciada en Biología. Aspirante a Investigadora. IES. Capdevila. Ciudad de La Habana, Cuba.

---

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: la salvia de playa, Pluchea carolinensis (Jacq.) G. Don., ha sido utilizada en la medicina tradicional para eliminar fiebres, digestiones lentas, dolores de riñones, de cabeza, ronqueras.
OBJETIVOS: clasificar al extracto fluido de salvia comenzando por el nivel de dosis 2 000 mg/kg, según el método de clase de toxicidad aguda.
MÉTODOS: se evaluó el extracto fluido de hojas secas de salvia de playa mediante el ensayo de las clases de toxicidad, que permite clasificar la sustancia en un rango de toxicidad. Se utilizaron 6 hembras de la sublínea Cenp:SPRD, procedentes del CENPALAB. Se les administró una dosis única de 2 000 mg/kg de peso corporal del extracto fluido de salvia de playa por vía oral, previo ayuno. El período de observación fue de 14 d, en el cual se monitorearon las condiciones ambientales diariamente, la aparición de signos de toxicidad y muerte, así como el peso corporal en los días 0, 7 y 14 del ensayo.
RESULTADOS: los animales alcanzaron 100 % de supervivencia. No se observaron signos de toxicidad, tras la administración de la sustancia ensayo en la dosis máxima de 2 000 mg/kg. En la evaluación anatomopatológica no se observaron alteraciones macroscópicas en la superficie externa de los animales y en ninguna de sus cavidades, órganos y tejidos.
CONCLUSIONES: de acuerdo con el método de toxicidad de clases la sustancia no es clasificada, DL₅₀ es mayor que 2 000 mg/kg .

Palabras clave: Clases de toxicidad, ratas, Pluchea carolinensis, Asteraceae.

---

ABSTRACT

INTRODUCTION: beach salvia, Pluchea carolinensis (Jacq.)G. Don has been used for long in traditional medicines to abate fevers, slow digestion, kidney pains, headache, and hoarseness.
OBJETIVES: to classify fluid extract from beach salvia according to the acute toxicity class method, by starting with a 2000 mg/kg dose.
METHODS: the fluid extract from beach salvia dry leaves was evaluated through the toxicity class test that allows classifying the substance into a range of toxicity. Six Cenp:SPRD subline female rats from CENPALAB (Center of lab animal production) were used. They were orally administered a single dose of 2000 mg of beach salvia fluid extract per kg of body weight on fasting. The observation period was 14 days to monitor daily environmental conditions, the occurrence of toxicity signs and death as well as the body weight at 0^th,7^th and 14^th day.
RESULTS: the six rats survived. No sign of toxicity was observed after the administration of the extract at 2000 mg/kg dose. In the anatomopathological assessment, no macroscopic alterations were seen in the external surface or in the cavities, organs and tissues of the animals.
CONCLUSIONS: according to this toxicity class method, the substance is not classified since LD₅₀ is higher than 2 000 mg/kg.

Key words: Toxicity class, rats, Pluchea carolinensis, Asteraceae.

---

 

 

INTRODUCCIÓN

Desde hace algunos años existe la tendencia, tanto en los países altamente desarrollados como en los del Tercer Mundo, con escasos recursos económicos, de retomar y desarrollar el uso de las plantas con fines terapéuticos. En Cuba, en 1991, se inició un programa que incluyó el uso científico de las plantas medicinales conocidas y su elaboración por la naciente industria farmacéutica.

En este programa se incluyó la evaluación de los complejos fitoterapéuticos que contienen las plantas medicinales, sus efectos terapéuticos, ensayos preclínicos y clínicos y la generalización de las experiencias resultantes.

La salvia ha sido utilizada en la medicina tradicional para eliminar fiebres, digestiones lentas, dolores de riñones, de cabeza, ronqueras, entre otros.¹ Además, se ha comprobado la existencia de propiedades antiinflamatorias de la tintura de salvia de playa (Pluchea carolinensis Jacq.) en el proceso agudo y en la fase crónica.² Estudios fitoquímicos de la planta aportaron la presencia de glucósidos, triterpenos, aceites esenciales, taninos y flavonoides (Instrucciones a los Proveedores. Instituto de Ecología y Sistemática, 2007).

La incorporación de un nuevo producto en el mercado lleva implícito la realización de un conjunto de investigaciones, incluidos los estudios toxicológicos que determinan la seguridad de su uso.³

El objetivo de este ensayo fue clasificar al extracto fluido de salvia comenzando por el nivel de dosis 2 000 mg/kg, según el método de clase de toxicidad aguda.

MÉTODOS

Sustancia ensayo

Pluchea carolinensis (Jacq.) G. Don., se recolectó en Sierra del Rosario, Pinar del Río, Cuba y fue identificada por el doctor Pedro Herrera Oliver, investigador del Instituto de Ecología y Sistemática (IES, La Habana, Cuba). Un ejemplar de la especie se conserva en el Herbario Nacional de Cuba "Onaney Muñiz" de esta institución, con número HAC 41725.

El extracto fluido de hojas secas de salvia es un producto elaborado por la Empresa de Medicamentos del Oeste y el IES (Instrucciones a los Proveedores. Instituto de Ecología y Sistemática, 2007), el cual se caracteriza por ser de color ámbar, olor característico y aspecto transparente; contiene 13,5 % de sólidos totales y 20,4 % de alcohol, pH 5-6, se conserva en refrigeración a 4 ºC. Se obtuvo por repercolación de 4 extracciones, según NRSP 311⁴ utilizando como menstruo alcohol 70 %. Se determinó la composición de metabolitos secundarios mediante la realización de tamizaje fotoquímico,⁵ se hizo el control de la calidad según NRSP 312.⁶

Animales

Se empleó un lote de 12 ratas hembras Cenp:SPRD de 5 a 6 semanas de edad, peso entre 140 y 150 g; la diferencia de peso entre los animales no excedió ± 20 % del valor promedio, con su correspondiente certificado de salud procedente del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB, La Habana, Cuba). Los animales se alojaron individualmente en cajas plásticas de policarbonato (makrolón) TECNIPLAST. Equipment for small animals. tipo T4, mantenidos en condiciones ambientales controladas (temperatura 24,6 ± 0,6 ºC, humedad relativa 58,8 ± 4,6 % y fotoperíodo 12 x 12 h luz/oscuridad), cumplieron un período de readaptación de 6 d. Se alimentaron con la fórmula pelletizada EMO:1004^® y agua, ambos esterilizados y suministrados a voluntad. La identificación de los animales se realizó mediante tarjetas, con un número único de identificación del animal.

Método de las clases de toxicidad aguda

El ensayo se realizó según lo establecido en la Organización para Cooperación y el Desarrollo Económico (OCDE)^7-9 y lo establecido en las Buenas Práctica de Laboratorio.¹⁰ La sustancia se administró por vía oral mediante intubación intragástrica, utilizando una cánula curva metálica, previo ayuno antes de la administración de la sustancia, en dosis inicial de 2 000 mg/kg.

Observaciones

Los animales se observaron de forma individual luego de 4 h de la administración, teniendo especial atención los primeros 30 min, y periódicamente durante las primeras 24 h; las observaciones se continuaron efectuando a diario hasta completar los 14 d. Se registraron diariamente los signos clínicos, así como el peso individual de los animales en los días 0, 7 y 14 del ensayo.

Signos de toxicidad

Las observaciones incluyeron con especial atención a los signos de temblores, convulsiones, salivación, diarrea, letargo, sueño, coma y muerte.

Examen anatomopatológico

Al culminar el ensayo las ratas fueron sacrificadas por el método de eutanasia de dislocación cervical. Se realizó la necropsia y se procedió a la observación macroscópica de las superficies externas del cuerpo, todos los orificios y cavidades (craneal, torácica y abdominal) y sus contenidos. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética Institucional del CENPALAB.

Análisis estadístico

El análisis estadístico se realizó con la ayuda del paquete estadístico SPSS, para un nivel de significación de p< 0,05 en la aceptación e interpretación de los resultados. Se determinó media y desviación estándar de los pesos corporales a los días 0, 7 y 14 del ensayo. Se realizó un ANOVA de una vía para determinar diferencias entre los días experimentales.

RESULTADOS

Los animales alcanzaron 100 % de supervivencia. No se observaron signos de toxicidad, tras la administración de la sustancia ensayo en la dosis máxima de 2 000 mg/kg.

Los valores individuales de peso corporal obtenidos en los días 0, 7 y 14 del ensayo se exponen en la tabla.

En la evaluación anatomopatológica no se observaron alteraciones macroscópicas en la superficie externa de los animales y en ninguna de sus cavidades, órganos y tejidos.

DISCUSIÓN

En la actualidad se ha incrementado el empleo de las plantas medicinales, dado el estudio sobre una base científica; con el conocimiento de su principio activo, la composición química y sus efectos adversos. Esto se avala por los ensayos farmacológicos tanto in vitro como in vivo, ensayos clínicos, de esta forma queda atrás el uso que se ha venido haciendo de una forma empírica y basada en la tradición de las especies vegetales.^11,12

El peso corporal es un parámetro de gran valor en la evaluación toxicológica de una sustancia y su disminución pudiera considerarse como un efecto de toxicidad al organismo. Este indicador en el estudio mostró estadísticamente diferencias entre los días del ensayo, con una tendencia al aumento continuo; tuvo un comportamiento similar a lo publicado para esta especie,¹³ lo cual demostró la inocuidad de este producto en ese sentido.

El modelo de clasificación de toxicidad aguda de Schlede (CTA) es un método alternativo que actúa teniendo como base el principio de las 3 "R", al reducir el número de animales y la consecuente reducción del número de muertes, que permite clasificar las sustancias dentro de rangos de toxicidad en muy tóxica, tóxica, nociva y no clasificada.^7,8

En este trabajo se muestran los resultados de un estudio toxicológico realizado al extracto fluido de salvia proveniente de una planta de amplia localización y uso tradicional en Cuba. El estudio es novedoso porque brinda una información inicial sobre la clasificación de la sustancia, obtenida de una planta poco estudiada en el mundo. Teniendo a la sustancia dentro de los rangos de toxicidad, como se reporta en la regulación, según el método de las clases de toxicidad aguda, se clasificó en la categoría 5 (no clasificada).⁷

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Roig JT. Plantas aromáticas y venenosas que crecen en Cuba. La Habana: Editorial Científico-Técnica; 1988. p. 407.

2. Rosales V, Gross MC, Rosales R, García R, León J, Vidal M. Evaluación farmacológica de Pluchea carolinensis Jacq (Salvia de playa) en animales de experimentación. Rev Cubana Plant Med. 1993;(2):65-7.

3. Zbinden G. Predictive value of animal studies in toxicology: Regulatatory Toxicol Pharmacol. 1991;14:167-77.

4. Norma Ramal de Salud Pública (NRSP) 311. Medicamento de origen vegetal. Ciudad de La Habana: Ministerio de Salud Pública; 1992. p. 57-8.

5. Schabra SC, Ulso FC, Mshin EN. Phytochemical screening of Tanzanian medical plants. J Etnopharmacol. 1984;11:157-9.

6. Norma Ramal de Salud Pública (NRSP) 312. Extractos fluidos y pinturas. Método de ensayo. Ciudad de La Habana: Ministerio de Salud Pública; 1992. p. 1-3.

7. Organización para Cooperación y el Desarrollo Económico, OCDE. Acute Toxic Class Method. Guidelines for the Testing of Chemicals. Section 4, Health effects; 2000 Nº 423. Paris.

8. Arteaga ME, Bada AM, Vega R, García G. Test de Clasificación de Schlede como alternativa en la determinación de la DL50. Revista Salud Animal 2000;22(3):183-8.

9. Vega R, García G, Freman M, Betancourt J, Rodeiro I, Arteaga ME. Estudio de Validación del método de clase tóxica aguda en Cuba. Rev Toxicol Española 2000;17:127-32.

10. Principios de las Buenas Prácticas de Laboratorio no Clínico de Seguridad Sanitaria y Medio Ambiental. República de Cuba. MINSAP. Buró Regulatorio para la Protección de la Salud Pública, 2004; Regulación 39.

11. Villar AM. Farmacognosia General. Madrid: Ed Síntesis; 1999.

12. Bruneton J. Elementos de fitoquímica y farmacognosia. España: Ed. Acribia Zaragoza; 1991.

13. Product Guide Effective Harlan outbred rats Sprague Dawley^{® TM}, (June 1, 2006) page 2 Indianapolis. [Consulta: 20 de enero 2007]. Disponible en http://www.harlan.com

Recibido: 12 de agosto de 2008.
Aprobado: 3 de octubre de 2008.

Dra. María Elena Arteaga Pérez. Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB). División de Toxicología y Experimentación Animal. Finca Tirabeque, Carretera del Cacahual Km 2½, Bejucal, La Habana. Cuba. Correo electrónico: [e-mail]